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Dissertação de Mestrado
DOI
10.11606/D.21.2017.tde-24022017-142221
Documento
Autor
Nome completo
Juliana Maia Rabêlo Nucci Garcia
E-mail
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
São Paulo, 2016
Orientador
Banca examinadora
Ngan, Phan Van (Presidente)
Azevedo, Juliana de Souza
Nakano, Eliana
Título em português
Adaptação de Ensaio Cometa às células meristemáticas provenientes de raízes de propágulos de Rhizophora mangle para avaliar a genotoxicidade no ambiente marinho
Palavras-chave em português
Rhizophora mangle
ensaio cometa
genotoxicidade
mangue
Resumo em português
O presente estudo teve como objetivo o estabelecimento de um método citogenotoxico, o ensaio cometa, adaptado às células meristemáticas provenientes de raízes de propágulos de mangue da espécie Rhizophora mangle para utilização em estudos sobre genotoxicidade em ambientes marinhos. Foram testados dois tipos de germinação de raízes, quatro diferentes soluções de extração de núcleos, duas soluções de lise e o não uso da lise, dois períodos de exposição à lise, dois períodos de relaxamento, dois períodos de eletroforese e a interação de duas condições de lise com dois diferentes tempos de relaxamento. A validação de método foi realizada através da exposição de núcleos a quatro diferentes concentrações de peróxido de hidrogênio. Os resultados mostraram que é possível a obtenção de cometas com núcleos extraídos de propágulos de Rhizophora mangle e que a validação de método apresenta uma relação concentração dependente entre o índice de dano de núcleos e a concentração do agente genotoxico testado. Os melhores parâmetros utilizados para obtenção de cometas através do método por nós adaptado são: PBS ou solução salina 12‰ como solução de extração, exposição à lise alcalina iônica por 60 minutos, 5 minutos de relaxamento e eletroforese em tampão pH>13, 0,8V/cm, 230mA por 20 minutos a 4ºC.
Título em inglês
Adaptation of comet assay to meristematic cells of mangrove root to study genotoxicity on the marine environment
Palavras-chave em inglês
Rhizophora mangle
comet assay
genotoxicity
mangrove
Resumo em inglês
This study aimed to establish a citogenotoxic method, the comet assay, adapted to the meristematic cells from propagule roots of red mangrove, Rhizophora mangle, for use in studies of genotoxicity in marine environments. Experiments were carried out to test two ways of root germination, four different nuclei extraction solutions, two lysis solutions and without lysis, two periods of exposure to lysis, two periods of unwinding, two periods of electrophoresis and the interaction of two lysis conditions with two different times of unwinding. Experiments on validation of the method were performed by exposing the nuclei to four different concentrations of hydrogen peroxide. The results showed that it is possible to obtain comets with nuclei extracted from the root of propagules of Rhizophora mangle and the validation data showed a dose-dependent relationship between the damage index and the concentration of the genotoxic agent tested. The best parameters to obtain comets using the method adapted by us are: PBS or saline 12‰ as extraction solution, exposure to alkaline lysis for 60 minutes, 5 minutes of unwinding and electrophoresis in buffer pH> 13, 0,8V/cm, 230mA for 20 min at 4ºC.
 
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Data de Publicação
2017-02-24
 
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