Introdução e objetivo: A correta identificação de anticorpos anti-eritrocitários é de grande importância em hemoterapia, tanto para compatibilizar sangue adequado para pacientes, evitando reações transfusionais hemolíticas, quanto na prevenção da doença hemolítica perinatal e outras doenças imuno-hemolíticas. As hemácias dos painéis comerciais não possuem os antígenos necessários ou zigozidade adequada para a correta identificação de tais anticorpos. Sendo assim, faz-se necessário o uso de hemácias complementares para auxiliar na identificação dos anticorpos. Tais hemácias podem ser obtidas em banco de doadores fenotipados e preservadas em soluções de 2 a 6°C (hipotérmica) ou por congelamento em nitrogênio líquido, métodos capazes de preservar a integridade dos eritrócitos e os antígenos eritrocitários por meses ou até anos. Este estudo teve como objetivo padronizar métodos de preservação de eritrócitos, tanto na forma de suspensões quanto em pequenas alíquotas por congelamento em nitrogênio líquido. Metodologia: Para padronizar métodos de preservação hipotérmica e por congelamento foram utilizadas amostras de doadores de sangue, fenotipadas para os antígenos D, C, E, c, e, Cw, K, M, N, S, s, P1, Lea, Leb, Fya, Fyb, Jka, Jkb, coletadas em tubo contendo EDTA. As amostras foram preservadas hipotermicamente nas soluções de Alsever modificada, BFI-1, BFI-2 e ID-CellStabTM e congeladas em nitrogênio líquido a -196°C nas soluções de S+D e PVP. Foram feitas análises quanto ao aparecimento hemólise, turvação do líquido sobrenadante, escurecimento das hemácias, presença de grumos e fungos para avaliar a estabilidade das suspensões mantidas em geladeira e simulação de uso na rotina laboratorial. Para avaliar a estabilidade dos antígenos em eritrócitos preservados em suspensões e por congelamento foram realizados testes qualitativos para os antígenos Fyb, Leb e testes quantitativos para os antígenos C e Fyb, pela metodologia gel-teste. Com a finalidade de prevenir o aparecimento de resultados falso-positivos em cartela gel-teste, foram realizados testes de Coombs indireto das hemácias preservadas com plasma de doador contendo anti-E. Resultados: As suspensões de hemácias preparadas com as quatro soluções não apresentaram alterações importantes durante o período de 45 dias, mantidas em geladeira e com simulação de uso na rotina. Os antígenos eritrocitários foram preservados tanto nas hemácias em suspensões quantos nas hemácias congeladas, entretanto em uma amostra preservada em BFI-2 o antígeno Fyb não foi detectado e nenhuma amostra apresentou resultado falso-positivo com plasma anti-E em cartela gel-teste, após utilização dos dois métodos de preservação. Os eritrócitos congelados com PVP apresentam recuperação superior aos congelados com S+D. Conclusão: Devido à viabilidade econômica, facilidade de uso na rotina laboratorial e ótima capacidade de preservar eritrócitos e antígenos de grupos sanguíneos, a solução BFI-1 pode ser utilizada para preservar eritrócitos de 2-6°C a 1% por até 30 dias e o método de preservação por congelamento em nitrogênio líquido em PVP pode ser utilizado para preservar eritrócitos com fenótipos raros por até 10 anos, devido maior capacidade de recuperação celular e ótima preservação dos antígenos.

Introduction and objective: The correct identification of erythrocytes antibody is of great importance in hemotherapy, suitable to make compatible blood for patients, preventing hemolytic transfusion reactions, and in the prevention of hemolytic disease of the newborn and other immuno-hemolytic diseases. The erythrocytes of commercial panels do not have the necessary antigens or double-dose antigen expression for correct identification of such antibodies. Therefore, it is necessary to use additional red blood cells to help identify antibodies. These can be obtained from phenotyped donors bank and preserved in solutions 2-6 ° C (hypothermic) or by freezing in liquid nitrogen, methods that can preserve the integrity of erythrocytes and erythrocyte antigens for months or even years. This study aimed to standardize methods of preservation of erythrocytes, both in the form of suspensions and in droplets by freezing in liquid nitrogen. Methodology: To standardize methods for hypothermic preservation and by freezing were used samples from phenotyped blood donors for D, C, E, c, e, Cw, K, M, N, S, s, P1, Lea, Leb , Fya, Fyb, Jka, Jkb antigens collected in tubes containing EDTA. Samples were preserved by cooling in modified Alsever solutions, BFI-1, BFI-2 and ID-CellStabTM and frozen in liquid nitrogen at -196 ° C in solutions of S + D and PVP. Analyzes were made of the onset hemolysis, turbidity of the supernatant liquid, darkening of red blood cells, the presence of lumps and fungi to assess the stability of the suspensions kept in the refrigerator and laboratory routine simulation. To evaluate the stability of antigens on erythrocytes in suspensions and preserved by freezing, qualitative tests for Fyb and Leb antigens, and quantitative tests for C and Fyb antigens were carried out by gel technique. In order to prevent false-positive results in gel methodology, indirect Coombs tests were made using preserved red blood cells and donor plasma containing anti-E. Results: The erythrocyte suspensions prepared with the four solutions showed no important changes during the period of 45 days, kept in the refrigerator and routine use simulation. Blood group antigens in erythrocytes were preserved both in suspensions and by freezing, but in one sample preserved in BFI-2 was not detected Fyb antigen and none showed false-positive results with plasma anti-E in gel methodology after the use of the two methods of preservation. Erythrocytes frozen with PVP exhibited better recovery than frozen Erythrocytes with S + D. Conclusion: Due to the economic viability, advantages of the use in the laboratory routine and great capacity to preserve erythrocytes and blood group antigens, the BFI-1 solution can be used to preserve erythrocytes of 2-6 ° C at 1% for up to 30 days and the method of preservation by freezing in liquid nitrogen in PVP can be used to preserve erythrocytes with rare phenotypes for up to 10 years due to higher capacity cell recovery and excellent erythrocyte antigens preservation.