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Dissertação de Mestrado
DOI
https://doi.org/10.11606/D.17.2014.tde-19012021-123151
Documento
Autor
Nome completo
Mirella Baroni Milan
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
Ribeirão Preto, 2014
Orientador
Banca examinadora
Scrideli, Carlos Alberto (Presidente)
Carlotti Junior, Carlos Gilberto
Marie, Suely Kazue Nagahashi
Título em português
Silenciamento do gene GDF15 e resposta à radioterapia e ao tratamento com temozolomida em linhagens celulares de glioblastoma
Palavras-chave em português
GDF15
Glioblastoma
Radioterapia
shRNA
Temozolomida
Resumo em português
O glioblastoma (GBM) é o mais comum e o mais maligno dos tumores primários cerebrais em adultos. Este tipo de tumor exibe alterações genéticas complexas, que leva a progressão maligna e resistência aos tratamentos tradicionais. Entre as alterações genéticas, nosso grupo observou um aumento da expressão do gene GDF15 em tumores primários de GBM quando comparados à substância branca não-neoplásica. O GDF15 é um fator de crescimento que em condições fisiológicas normais está pouco expresso, mas em casos de inflamação e câncer sua expressão é aumentada. Níveis elevados de GDF15 estão associados com pior prognóstico e com resistência aos tratamentos em diversos tipos de tumores. Esse projeto teve por objetivo correlacionar o silenciamento do GDF15 com a sensibilidade à radioterapia e ao tratamento com a droga temozolomida (TMZ) em linhagens celulares de GBM pediátrico e adulto. Para analisar essas correlações foi realizada análise da expressão gênica do GDF15 nas linhagens celulares de GBM por qRT-PCR. As linhagens de GBM adulto e pediátrico, que apresentaram maiores níveis de expressão, tiveram o GDF15 silenciado pela técnica de transdução com RNA de interferência (shRNA). Após a comprovação da inibição do GDF15, foram feitos os tratamentos independentes (Radioterapia e TMZ) seguido dos estudos funcionais in vitro. Das 9 linhagens de GBM analisadas, 8 apresentaram expressão aumentada do GDF15. A linhagem de GBM pediátrico, KNS42, e a linhagem de GBM adulto, U343, foram as que mais expressaram GDF15 em comparação com tecido não neoplásico. Após o silenciamento, houve alteração na capacidade clonogênica da linhagem KNS42 se comparada com o controle, mas não houve alteração na taxa de proliferação celular. A U343 não sofreu efeito da inibição do GDF15. O silenciamento associado com a TMZ teve efeito somente no aumento da proliferação celular da U343, com dados significantes após 72 horas de tratamento. A KNS42 não apresentou mudança na sensibilidade à TMZ após o silenciamento do GDF15. O silenciamento associado com radioterapia teve efeito na linhagem U343, que apresentou uma menor fração sobrevivente de colônias na linhagem silenciada, na dose de 4Gy, em comparação com a linhagem controle. A KNS42 não apresentou correlação entre o silenciamento e a resposta à radioterapia. Esses dados mostram que o silenciamento do GDF15 promoveu respostas diferentes na linhagem U343 e na linhagem KNS42, que pode ser explicado pelas características moleculares distintas do GBM pediátrico e adulto.
Título em inglês
GDF15 knockdown and response to treatment with temozolomide and radiotherapy in glioblastoma cell lines
Palavras-chave em inglês
GDF15
Glioblastoma
Radiotherapy
shRNA
Temozolomide
Resumo em inglês
Glioblastoma (GBM) is the most common and most malignant primary brain tumors in adults. Exhibits complex genetic changes that leads to malignant progression, and resistance to standard therapies. Among the genetic alterations, our group observed a high expression of GDF15 in primary GBM tumors. The GDF15 is a growth factor that under normal physiological conditions is weakly expressed but in case of inflammations and malignancies your expression is increased. The high level of GDF15 is associated with poor prognosis and radio and chemoresistance in many types of tumors. This project aimed to correlate the silencing of GDF15 with sensitivity to radiotherapy and TMZ in adult and child GBM cell lines. To analyze these correlations, was made the analysis of GDF15 expression in GBM cell lines by qRT-PCR. The two cell lines that expressed more were transduced by the technique of short hairpin RNA (shRNA), which promoted the knockdown of GDF15. After verifiy the inhibition of GDF15 gene and protein, were made independent treatments (radiotherapy and TMZ) followed by in vitro assays. Eight of nine GBM cells lines showed high expression of GDF15. The pediatric GBM cell line, KNS42 and adult GBM cell line, U343, had the higher expression of GDF15 compared with normal tissue. After silencing, KNS42 showed decreased clonogenic capacity compared with control, but there was no change at cell proliferation. The U343 was not affected by GDF15 inhibition. The silencing associated with TMZ only had effect in increasing proliferation of U343 with significant data after 72 hours of treatment. The KNS42 showed no change in sensitivity to TMZ after the GDF15 silencing. The silencing associated with radiotherapy had effect at U343, which showed a lower fraction of surviving colonies in the silenced cell line at the 4Gy dose, compared with the control cell line. The KNS42 showed no correlation between silencing and sensitivity to radiotherapy. These data show that silencing of GDF15 promoted different responses in U343 and KNS42 cell lines, which can be explained by different molecular characteristics of GBM pediatric and adult.
 
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MIRELLABARONI.pdf (1.58 Mbytes)
Data de Publicação
2021-01-28
 
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