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Doctoral Thesis
DOI
https://doi.org/10.11606/T.17.2023.tde-08022024-164651
Document
Author
Full name
Carolina Sponchiado Miura
Institute/School/College
Knowledge Area
Date of Defense
Published
Ribeirão Preto, 2023
Supervisor
Committee
Valera, Fabiana Cardoso Pereira (President)
Avelino, Melissa Ameloti Gomes
Fujita, Reginaldo Raimundo
Massuda, Eduardo Tanaka
Title in Portuguese
Prevalência do SARS-CoV-2 em crianças submetidas à adenotonsilectomia, na ausência de sintomas de infecção respiratória aguda
Keywords in Portuguese
ACE2
COVID-19
SARS-CoV-2
TMPRSS2
Tonsilas
Abstract in Portuguese
Introdução: Desde o início da pandemia, em dezembro de 2019, o SARS-CoV-2 já causou mais de seis milhões de mortes. Pelo menos para as variantes iniciais, acreditou-se que as crianças eram menos suscetíveis à infecção, tanto por estarem menos expostas, como por apresentarem quadros predominantemente leves ou assintomáticos. No entanto, a real prevalência da infecção pelo SARS-CoV-2 em crianças é desconhecida, assim como por quanto tempo o vírus persiste no organismo após a infecção aguda. Objetivos: Avaliar a prevalência do SARS-CoV-2 em tonsilas palatinas, adenoides e secreções respiratórias de crianças, sem sinais agudos de infecção de vias aéreas superiores, submetidas à adenotonsilectomia durante a pandemia e avaliar a expressão da enzima conversora da angiotensina 2 (ACE2) e da protease transmembrana serina 2 (TMPRSS2) nestes tecidos. Casuística e Métodos: Foram selecionadas crianças entre três e 12 anos submetidas à adenotonsilectomia. O principal critério de exclusão era ter apresentado sintomas de infecção aguda de vias aéreas superiores no mês anterior à cirurgia. Durante a cirurgia foram coletadas amostras de tonsilas palatinas e adenoides, lavado nasal, cytobrush nasal e sangue. As tonsilas palatinas e adenoides foram testadas por meio de qRT-PCR. Os tecidos positivos também foram submetidos à imuno-histoquímica. O qRT-PCR também foi utilizado para testar os lavados nasais e cytobrushes nasais. As amostras de sangue foram testadas utilizando um teste rápido de IgM/IgG contra o SARS-CoV-2. Por fim, foi utilizada imunofluorescência para avaliar a expressão de ACE2 e TMPRSS2 nas amostras de tonsilas palatinas e adenoides. Resultados: Quarenta e oito crianças (18 meninas, com idade média de 5,5 anos) participaram do estudo. Nenhuma delas havia sido vacinada contra COVID no momento da cirurgia. Apenas duas tinham histórico de diagnóstico de COVID entre três e cinco meses antes da cirurgia. O RNA do SARS-CoV-2 foi detectado em pelo menos uma amostra de 12 (25%) pacientes - 20% das tonsilas palatinas, 16,27% das adenoides, 10,41% dos cytobrushes nasais e 6,25% dos lavados nasais. Das 16 amostras de tonsilas palatinas e adenoides positivas, 15 também demonstraram positividade para nucleoproteína do SARS-CoV-2 na imuno-histoquímica. A imunofluorescência in situ revelou maior expressão de ACE2 e TMPRSS2 nos tecidos tonsilares infectados pelo SARS-CoV-2. Conclusões: De acordo com esses resultados, a prevalência de infecção por SARS-CoV-2 parece ser maior do que a reportada em literatura para crianças nessa faixa etária. As tonsilas palatinas e adenoides são locais importantes de infecção e podem ser um reservatório para o vírus, além de perpetuar o processo inflamatório. Além disso, tonsilas palatinas e adenoides infectadas pelo SARS-CoV-2 expressam maiores concentrações das proteínas ACE2 e TMPRSS2, essenciais para a entrada do SARS-CoV-2 na célula. No entanto, ainda não está claro o impacto desses resultados na transmissão da doença.
Title in English
Prevalence of SARS-CoV-2 in children submitted to adenotonsillectomy, in the absence of symptoms of acute respiratory infection
Keywords in English
ACE2
COVID-19
SARS-CoV-2
TMPRSS2
Tonsils
Abstract in English
Introduction: Since the start of the pandemic in December 2019, SARS-CoV-2 has caused more than six million deaths. At least for the initial variants, it was believed that children were less susceptible to infection, both because they were less exposed and because they had predominantly mild or asymptomatic conditions. However, the actual prevalence of SARS-CoV-2 infection in children is unknown, as is how long the virus persists in the body after acute infection. Objectives: were: i) to assess the prevalence of SARS-CoV-2 in tonsils, adenoids and respiratory secretions of children without acute signs of upper airway infection, who underwent adenotonsillectomy during the pandemic; ii) to evaluate the expression of ACE2 and TMPRSS2 in these tissues. Casuistic and Methods: Children between 3 and 12 years old who underwent adenotonsillectomy were selected. The main exclusion criterion was having presented symptoms of acute upper airway infection in the month prior to surgery. During surgery, samples of tonsils and adenoids, nasal wash, nasal cytobrush and blood were collected. Tonsils and adenoids were tested by qRT-PCR. Positive tissues were also submitted to immunohistochemistry. qRT-PCR was also used to test nasal washes and nasal cytobrushes. Blood samples were tested using a rapid IgM/IgG test against SARS-CoV-2. Finally, immunofluorescence was used to evaluate the expression of angiotensin converting enzyme 2 (ACE2) and transmembrane serine protease 2 (TMPRSS2) in tonsil and adenoid samples. Results: Forty eight children (18 girls, mean age 5.5 years) participated in the study. None of them had been vaccinated against COVID at the time of surgery. Only two of them had a history of previous diagnosis of COVID between three and five months before the surgery. SARS-CoV-2 RNA was detected in at least one sample of 12 (25%) patients - 20% of palatine tonsils, 16.27% of adenoids, 10.41% of nasal swabs and 6.25% of nasal washes. Of the 16 positive palatine tonsil and adenoid samples, 15 also showed positivity for SARS-CoV-2 nucleoprotein in immunohistochemistry. In situ immunofluorescence revealed increased expression of ACE2 and TMPRSS2 in tonsillar tissues infected by SARS-CoV-2. Conclusions: According to these results, the prevalence of SARS-CoV-2 infection seems to be higher than that reported in the literature for children in this age group. Palatine tonsils and adenoids are important sites of infection and can be a reservoir for the virus, as well as perpetuate the inflammatory process. In addition, tonsils and adenoids of children infected by SARS-CoV-2 express higher levels of ACE2 and TMPRSS2 proteins, essential for the entry of SARS-CoV-2 into the cell. However, the impact of these results on disease transmission is still unclear.
 
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Publishing Date
2024-03-20
 
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