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Tesis Doctoral
DOI
https://doi.org/10.11606/T.17.2021.tde-11062021-083557
Documento
Autor
Nombre completo
Jacqueline Ferreira Faustino Barros
Instituto/Escuela/Facultad
Área de Conocimiento
Fecha de Defensa
Publicación
Ribeirão Preto, 2021
Director
Tribunal
Rocha, Eduardo Melani (Presidente)
Jorge, Eliane Chaves
Motta, Ana Carolina Fragoso
Tamashiro, Edwin
Título en portugués
Avaliação do filme lacrimal e da superfície ocular em modelos animais de olho seco
Palabras clave en portugués
Citocinas de reparação tecidual
Citocinas inflamatórias
Diabetes melittus
Hipotireoidismo
Olho seco
qPCR
Resumen en portugués
Objetivo: Avaliar a superfície ocular (SO) de modelos animais com a doença do olho seco (DOS) em doenças metabólicas e uso crônico de cloreto de benzalcônio. E compara-los ao grupo controle (CG) em critérios funcionais, histológicos e moleculares. Métodos: Foram utilizados ratos Wistar machos, pesando 220-250g, induzidos para: a) Diabetes mellitus (DM) por injeção intravenosa única de estreptozotocina a 60 mg/kg, e alojados durante 8 semanas em biotério; b) Hipotireoidismo (HT) induzidos com metimazol 500 mg/l diluído na água de bebedouro, durante 5 semanas); c) Uso crônico de cloreto de benzalcônio (BAK)instilação tópica ocular de colírio com BAK a 0,2% duas vezes ao dia, durante 7 dias. Estes foram comparados com ratos CG pareados por idade e sexo (n=10/em cada grupo de estudo). Avaliação funcional: teste de fenol vermelho, coloração de fluoresceína, teste de sensibilidade através de capsaicina 10µM, osmolariadade do filme lacrimal e sanguínea. Avaliação histológica da glândula lacrimal (GL) e córnea (CO) avaliando a espessura do epitélio. Avaliação molecular de expressão relativa de mRNA pelo método de qPCR em tempo real utilizado para comparar a expressão de Il1 beta, Il6, Mmp9 e Tnf alfa na CO, GL, e gânglio do trigêmeo (GT). E ainda, marcadores de reparação tecidual Bmp7, Fgf10, Runx1, Runx3 e Smad1 em GL. Além de receptor TRPV1 em CO. E ainda utilizamos a avaliação de estresse oxidativo da catalase e glutationa oxidada (GSSG) por métodos fluorimétricos na GL. Resultados: O grupo DM apresentou menor fluxo lacrimal e maior osmolaridade sanguínea (p=0,02 e p<0,001 respectivamente); Maior atividade da catalase na GL (p<0,001); Menor expressão de TRPV1 na CO (p=0,03), maior expressão de Il1b e Il6 em GL e GT (p=0,03 e p=0,03), menor expressão de Runx1 GL (p=0,02). O grupo HT apresentou maior osmolaridade lacrimal (p<0,001); Maior atividade da catalase na GL (p=0,02); apresentou expressão reduzida de Mmp9 no CO (p< 0,001), maior expressão de Runx3 na GL (p=0,01) e maior expressão de Il1b no GT (p = 0,004). O grupo BAK apresentou maior sensibilidade ao teste pata olho (p=0,001) maior osmolaridade sanguínea (p=0,001); E ainda, menor espessura do epitélio da CO (P<0,001); Maior expressão de Il1b, Il6 na GL (p=0,001 e p=0,03 respectivamente) e menor expressão de Mmp9 e Runx3 (p=0,009 e p=0,009); Maior expressão de Il1b e Tnfa no GT (p=0,01 e p=0,04). Conclusões: Nossos modelos de estudo da DOS causaram mudanças em toda unidade funcional lacrimal. Nos DM levaram a perda de sensibilidade e inflamação na SO e GT. No grupo HT, inflamação na SO e GT e aumento nos mediadores de reparação tecidual da GL. E o BAK, hiperestesia na SO e inflamação na GL e GT. Nós esperamos que estas observações possam contribuir em estudos futuros em possíveis diagnósticos e tratamentos para DOS.
Título en inglés
Evaluation of tear film and ocular surface in animal models with dry eye
Palabras clave en inglés
Diabetes melittus
Dry eye
Hypothyroidism
Inflammatory cytokines
qPCR
Repair cytokines
Resumen en inglés
Objective: To evaluate the ocular surface (OS) of animal models with dry eye disease (DES) in metabolic diseases and chronic use of benzalkonium chloride. And compare them to the control group (CG) on functional, histological and molecular criteria. Methods: Male Wistar rats, weighing 220-250g, were used for: a) Diabetes mellitus (DM) by single intravenous injection of streptozotocin at 60 mg/kg, and housed for 8 weeks in a vivarium; b) Hypothyroidism (HT) induced with methimazole 500 mg/l diluted in drinking water for 5 weeks); c) Chronic use of benzalkonium chloride (BAK) topical eye drop with 0.2% BAK twice daily for 7 days. These were compared with CG rats matched for age and sex (n = 10/in each study group). Functional evaluation: red phenol test, fluorescein staining, sensitivity test using 10 µM capsaicin, tear film and blood osmolariability. Histological evaluation of the lacrimal gland (GL) and cornea (CO) evaluating the thickness of the epithelium. Molecular evaluation of relative mRNA expression by the real-time qPCR method used to compare the expression of Il1 beta, Il6, Mmp9 and Tnf alpha in CO, GL, and trigeminal ganglion (GT). Also, tissue repair markers Bmp7, Fgf10, Runx1, Runx3 and Smad1 in GL. In addition to TRPV1 receptor in CO. And we also used the oxidative stress assessment of catalase and oxidized glutathione (GSSG) by fluorimetric methods in GL. Results: The DM group had lower tear flow and greater blood osmolarity (p = 0.02 and p <0.001 respectively); Greater activity of catalase in GL (p <0.001); Lower expression of TRPV1 in CO (p = 0.03), higher expression of Il1b and Il6 in GL and GT (p = 0.03 and p = 0.03), lower expression of Runx1 GL (p = 0.02). The HT group showed greater lacrimal osmolarity (p <0.001); Greater activity of catalase in GL (p = 0.02); showed reduced expression of Mmp9 in CO (p <0.001), higher expression of Runx3 in GL (p = 0.01) and higher expression of Il1b in GT (p = 0.004). The BAK group showed greater sensitivity to the eye test (p = 0.001) greater blood osmolarity (p = 0.001); Also, less thickness of the CO epithelium (P <0.001); Higher expression of Il1b, Il6 in the GL (p = 0.001 and p =0.03 respectively) and lower expression of Mmp9 and Runx3 (p = 0.009 and p = 0.009); Higher expression of Il1b and Tnfa in the TG (p = 0.01 and p = 0.04). Conclusions: Our DOS study models caused changes in the entire lacrimal functional unit. In DM, they led to loss of sensitivity and inflammation in the OR and GT. In the HT group, inflammation in the SO and GT and an increase in the tissue repair mediators of the GL. In addition, BAK, hyperesthesia in the OS and inflammation in the GL and GT. We hope that these observations can contribute to future studies on possible diagnoses and treatments for DOS.
 
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Fecha de Publicación
2021-06-18
 
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