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Dissertação de Mestrado
DOI
https://doi.org/10.11606/D.17.2007.tde-21022024-125646
Documento
Autor
Nome completo
Antônio Roberto Rodrigues Abatepaulo
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
Ribeirão Preto, 2007
Orientador
Banca examinadora
Santos, Isabel Kinney Ferreira de Miranda (Presidente)
Bechara, Gervasio Henrique
Nishi, Sandra Mayumi
Título em português
Imunobiologia das infestações de bovinos pelo carrapato Boophilus microplus: estudo dos correlatos histológicos e moleculares de resistência e de susceptibilidade
Palavras-chave em português
Bovinos
Carrapatos
Marcadores moleculares
Vacinas
Variabilidade genética
Resumo em português
Carrapatos são artrópodes hematófagos de grande importância médica e veterinária devido aos prejuízos diretos e indiretos por eles causados ao se fixarem em seus hospedeiros, além de serem importantes vetores de microrganismos patogênicos. Durante seu repasto de sangue, os carrapatos estimulam a resposta imune e inflamatória dos hospedeiros, mas suprimem a imunidade natural e adquirida do hospedeiro por meio de fatores presentes na sua saliva que é inoculada durante a hematofagia. Este estudo analisou os componentes teciduais e moleculares presentes nas reações cutâneas induzidas por extrato de larvas de B. microplus não alimentadas ou por diferentes níveis de infestações com carrapatos adultos afixados à pele de bovinos geneticamente resistentes (Bos taurus indicus, raça nelore) e susceptíveis (B. taurus taurus, raça Holandês Preto e Branco - HPB) ao carrapato. Amostras de pele foram coletadas para análise 1, 72 e 96 horas após o inoculo com extrato de larva. No momento da reação tardia (72 e 96 horas) o infiltrado celular recrutado à pele de animais da raça Nelore apresentava um número significativamente maior de eosinófilos e basófilos do que a pele de animais HPB. Relativo à pele coletada 1 h após o inóculo de extrato ou à pele de bovinos HPB, a expressão de genes codificantes de IGF-1, MCP-1, IP-10, TGF-β, IDO, SLURP-1 foi significativamente maior em animais Nelores. Na pele contendo fêmeas em alimentação, constatou-se que o nível da infestação interfere no nível de expressão gênica em animais HPB que apresentaram diminuição significativa da expressão de MIP-1α, IGF-1 e IL-8 e aumento relativo de IL-4 e TGFβ na baixa infestação. A pele de Nelores infestada apresentou de expressão relativa de IDO, IL-10, IP-10, IGF-1, IFNγ MCP-1, MIP1α, IL-8 e iNOS e IL-5 significativamente (P<0,05) maior do que a pele de HPBs infestada. A pesquisa de mutações únicas (SNPs, de single nucleotide polymorphisms) nos genes estudados que apresentaram variação significativa na sua expressão revelou vários SNPs, inclusive alguns específicos para animais zebuínos (MCP-1, MIP-1α, TNF-α e IFN-γ). Os resultados obtidos neste estudo permitem uma melhor compreensão da interação parasita-hospedeiro. Mostram que na pele de uma raça bovina resistente ao carrapato os níveis de expressão de genes codificantes de moléculas quimiotáticas para basófilos e eosinófilos é maior do que em pele de uma raça bovina suscetível a esse parasita, fornecendo as bases dos mecanismos imunológicos que devem ser estimulados por vacinas empregadas para o controle do artrópode. Também mostram que ocorre variabilidade genética nos genes expressos diferencialmente, variações estas que podem constituir marcadores moleculares de resistência para a seleção de bovinos resistentes a carrapatos.
Título em inglês
Immunobiology of cattle infestations by the tick Boophilus microplus: study of histological and molecular correlates of resistance and susceptibility
Palavras-chave em inglês
Cattle
Genetic variability
Molecular markers
Ticks
Vaccines
Resumo em inglês
Ticks are hematophagous arthropods of medical and veterinary importance due to the deleterious effects caused by their blood feeding on hosts, and because they are vectors of pathogenic microorganisms. During the feeding process ticks stimulate the host's immune and inflammatory responses. However, they are capable of suppressing innate and acquired immunity through soluble factors present in the saliva inoculated during the blood meal. This study analyzed the cellular and molecular components in the cutaneous reactions of bovine skin injected with an extract of unfed larvae (UFLE) of B. microplus or infested with different numbers of adult feeding ticks. Two different breeds with contrasting heritable phenotypes were examined: Nelore (Bos taurus indicus), which is highly resistant to ticks, and Holstein (B. t. taurus), which is very susceptible. Biopsies of skin were collected 1, 72 and 96 hours after treatment with UFLE. The cellular infiltrate recruited to the skin of Nelores at the time of the delayed reaction (72 and 96 h) contained significantly more basophils and eosinophils than similarly treated skin from Holsteins. When compared to skin collected 1 hour after treatment with UFLE, the expression of genes coding for IGF-1, MCP-1, IP-10, TGF-β, IDO, SLURP-1 increased significantly in Nelore bovines. ln skin infested with feeding adults the level of infestation modulated the level of expression of immune response genes in Holsteins, which presented a significant decrease in the expression of MIP-1α, IGF-1 e IL-8. lnfested skin from Nelores presented significantly (P<0.05) higher levels of expression of genes coding for IDO, IL-10, IP-10, IGF-1, IFNγ, MCP-1, MIP1α, IL-8 e iNOS e IL-5 than infested skin from Holsteins. Holsteins presented with a higher relative expression of IL-4 and TGFB during low infestations than Nelores. A search for mutations in the genes that presented significant changes in the level of their expression revealed several single nucleotide o polymorphisms (SNPs), including some that specific to the Nelore breed (MCP-1, MIP-1α, TNF-α e IFN-γ). The results obtained in this study show that skin from a resistant breed of bovines is able to express higher levels of messages for cytokines that recruit basophils and eosinophils than that from susceptible breeds. This points out to the mechanisms of immune resistance that should be incorporated into the formulation of anti-tick vaccines. They also show that genetic varibility occurs in the genes that are differentially expressed in skin and this variability may contribute towards a collection of molecular markers for breeding tick-resistant cattle.
 
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Data de Publicação
2024-02-21
 
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