Aspergillus fumigatus é o principal agente causador da aspergilose invasiva, doença que apresenta alta taxa de mortalidade, e acomete principalmente indivíduos imunocomprometidos. A. fumigatus apresenta distribuição mundial e grande produção de conídios, fazendo com que o trato respiratório humano seja continuamente exposto aos conídios fúngicos. Normalmente, a destruição de conídios e o controle da infecção, é realizado por células da imunidade inata. Essas são capazes de identificar o fungo e seus produtos respondendo de forma adequada. Nesse sentido, temos que as vesículas extracelulares (EVs) produzidas pelo fungo podem interagir com células do sistema imune modulando sua resposta. As EVs são estruturas esféricas formadas por uma bicamada lipídica que possuem várias ações descritas. Podem atuar na comunicação celular, no desenvolvimento da parede celular, na aquisição de resistência a antifúngicos e na modulação da resposta imune do hospedeiro. Importantes estudos têm descrito a interação de EVs fúngicas com células do sistema imune inato, demonstrando potencial imunomodulador dessas EVs. Dessa forma, nos propomos a verificar a capacidade imunomoduladora de EVs de A. fumigatus, principalmente sobre células da imunidade inata. Nesse estudo, estimulamos células da imunidade inata e células mononucleares do sangue periférico (PBMCs, do inglês peripheral blood mononuclear cell) com EVs de A. fumigatus e avaliamos a proteção conferida pelas EVs em modelo in vivo de Galleria mellonella. Adicionalmente, verificamos que macrófagos RAW 264.7 e AMJ2-C11 foram capazes de produzir TNF-α quando estimulados com EVs, mas não NO, IL-6, IL1-β e superóxido. Entretanto, macrófagos RAW 264.7 aumentaram a expressão de iNOS e Arginase-1, enquanto macrófagos AMJ2-C11 aumentaram somente Arginase-1. O estímulo com EVs produzidas por A. fumigatus foi capaz de induzir alteração conformacional em células RAW 264.7, mas não em AMJ2-C11, como verificado por microscopia de luz e pela maior transcrição de C11b e CD18. Ainda, em neutrófilos estimulados com as EVs de A. fumigatus, não houve a produção de NETs (do inglês neutrophil extracelular trap) e tão pouco de TNF-α ou IL-10, enquanto PMBCs foram capazes de produzir IL-6, mas não TNF-α e IL-10. Apesar da relativamente baixa resposta imune gerada, a administração de EVs em G. Mellonella foi capaz de proteger a larva frente ao desafio fúngico. Nossos resultados sugerem que EVs de A. fumigatus possuem limitada ação inflamatória em células da imunidade inata, porém exercem um papel na proteção em modelo experimental de infeção fúngica.

Aspergillus fumigatus is the main causative agent of invasive aspergillosis, a disease that has a high mortality rate and may affects immunocompromised patients. A. fumigatus has worldwide distribution and large conidia production, causing the human tract to be continuously exposed to conidia. Usually, conidia destruction and infection control are carried out by innate immune cells. They can identify the fungus and their products and respond appropriately. In this sense, we have the extracellular vesicles (EVs) produced by the fungus could interact with immune cells modulating its response. EVs are spherical structures formed by a lipid bilayer that have several described functions. They may act in cell communication, cell wall development, acquisition of resistance to antifungal agents, and modulation the host immune response. Important studies have described the interaction of fungal EVs with cells of the innate immune system, demonstrating the immunomodulatory potential of these EVs. This way we proposed to verify the immunomodulatory capabilities of A. fumigatus EVs, primarily over innate immunity cells. In this study, we stimulated innate immune cells and peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) with A. fumigatus EVs and evaluated the conferred protection by EVs through in vivo model of Galleria mellonella. Furthermore, we verified that RAW 264.7 and AMJ2-C11 macrophages were able to produce TNF-α when stimulated with EVs, but not NO, IL-6, IL1-β, and superoxide. However, RAW 264.7 macrophages increased the expression of iNOS and Arginase-1, while AMJ2-C11 macrophages only increased Arginase-1. Stimulation with A. fumigatus EVs was able to induce conformational change in RAW 264.7 cells, but not in AMJ2-C11, as verified by light microscopy and increased transcription from C11b and CD18. Furthermore, neutrophils stimulated with A. fumigatus EVs, were not able to produce neutrophil extracellular traps (NETs) neither TNF-α and IL-10, while PMBCs were able to produce IL-6, but not TNF-α and IL-10. Despite the relatively low immune response produced, the administration of A. fumigatus EVs in G. mellonella was able to protect the larva against the fungal challenge. Our results suggest that A. fumigatus EVs possess a limited inflammatory action over innate immune cells, however, exert a role in the protection against the fungal infection.