Objetivo: avaliar a viabilidade, atividade mitocondrial, oxidação e danos no tecido conjuntivo de tecido ovariano bovino cultivado em três diferentes sistemas 3D: levitação magnética (LM), matriz de fibrina-alginato (FA) ou matriz de alginato (ALG). Métodos: Fragmentos ovarianos foram cultivados in vitro com nanopartículas de ouro e óxido de ferro reticuladas por poli-L-lisina (LM) ou FA 1% ou ALG 1%. Os fragmentos foram subdivididos em controle fresco (FC, D0), dia 1 (D1) e dia 7 (D7) após o cultivo. Os fragmentos foram avaliados quanto a viabilidade folicular, fibrose (Picrosirius Red), níveis intercelulares de produção de espécies reativas de oxigênio (ROS, técnica de DCF) sinais de degeneração celular (técnica de iodeto de propídio) e atividade mitocondrial (técnica MitoTracker Orange CMTMRose). As análises estatísticas realizadas foram teste de Kruskal-Wallis, ANOVA, teste exato de Fisher e qui-quadrado por meio do software SAS. Resultados: Viabilidade folicular: o LM apresentou uma maior (P < 0,05) quantidade de folículos normais quando comparado aos demais grupos (FA e ALG). O ALG foi o grupo que mais (P < 0,05) apresentou folículos anormais em comparação ao LM e a FA. Fibrose: o LM apresentou mais semelhanças (P > 0,05) ao CF com relação a quantidade de colágeno tipo I e III. Produção de ROS: todos os grupos apresentaram produção de ERO maior (P < 0,05) quando comparados ao CF (P > 0,05). Viabilidade tecidual: Ao comparar a LM, a FA e o ALG com o CF, observou-se menores (P < 0,05) taxas de degeneração tanto em D1 quanto em D7. Atividade mitocondrial: com relação aos dias D1 e D7, contatou-se que a LM e a FA apresentaram diminuição (P < 0,05) das taxas em D7. Conclusão: O cultivo tridimensional por levitação magnética favorece e preserva a morfologia, a vitalidade e a capacidade respiratória do tecido ovariano durante o cultivo in vitro, sendo mais eficiente em termos de ativação folicular do que os demais cultivos. Nas primeiras 24 horas parece haver um período de reparo após estresse de toda manipulação tecidual. Além disso, em D1 há uma maior taxa de ativação folicular sugerindo não haver necessidade de um cultivo tão extenso para a obtenção de folículos ativados com a morfologia normal. Assim, o cultivo tridimensional por levitação é um método promissor para o cultivo in vitro de tecido ovariano com folículos pré-antrais inclusos.

Objective: to evaluate the viability, mitochondrial activity, oxidation and connective tissue damage of bovine ovarian tissue cultured in three different 3D systems: magnetic levitation (LM), fibrin-alginate matrix (FA) or alginate matrix (ALG). Methods: Ovarian fragments were cultured in vitro with gold and iron oxide nanoparticles crosslinked by poly-L-lysine (LM) or 1% FA or 1% ALG. The fragments were subdivided into fresh control (FC, D0), day 1 (D1) and day 7 (D7) after cultivation. The fragments were evaluated for follicular viability, fibrosis (Picrosirius Red), levels of intercellular production of reactive oxygen species (ROS, DCF technique), signs of cell degeneration (propidium iodide technique) and mitochondrial activity (MitoTracker Orange CMTMRose technique). The statistical analyzes carried out were the Kruskal-Wallis test, ANOVA, Fisher's exact test and chi-square using the SAS software. Results: Follicular viability: LM showed a greater (P < 0.05) number of normal follicles when compared to the other groups (FA and ALG). ALG was the group that most (P < 0.05) presented abnormal follicles compared to LM and FA. Fibrosis: LM showed more similarities (P > 0.05) to FC regarding the amount of type III and I collagen. ROS production: all groups showed higher ROS production (P < 0.05) when compared to CF (p>0.05). Tissue viability: When comparing LM, FA and ALG with CF, lower (P < 0.05) degeneration rates were observed in both D1 and D7. Mitochondrial activity: regarding days D1 and D7, it was found that LM and AF showed a decrease (P < 0.05) in rates on D7. Conclusion: Three-dimensional cultivation by magnetic levitation favors and preserves the morphology, vitality and respiratory capacity of the ovarian tissue during in vitro cultivation, being more efficient in terms of follicular activation than other cultures. In the first 24 hours there seems to be a repair period after the stress of all tissue manipulation. In addition, in D1 there is a higher rate of follicular activation, suggesting that there is no need for such an extensive culture to obtain activated follicles. Thus, three-dimensional levitation cultivation is a promising method for in vitro cultivation of ovarian tissue with preantral follicles included.