Os lipídios desempenham um papel fundamental na membrana plasmática do espermatozoide, ajudando a manter sua integridade estrutural, funcionalidade e estão diretamente relacionados ao processo de capacidade de fertilização. Apesar de sua relevância, as informações sobre o perfil lipídico das células espermáticas humanas são limitadas. Sendo assim, o principal objetivo desse estudo foi realizar a caracterização lipídica de espermatozoides de homens férteis e homens inférteis com oligoastenozoospermia por meio da técnica de cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas (LC-MS/MS) e o perfilamento por monitoramento de reações múltiplas (MRM). Foi realizado um estudo prospectivo observacional onde extratos lipídicos de amostras seminais de 10 homens férteis e 10 homens inférteis foram analisados. A extração lipídica foi feita através do protocolo de Bligh & Dyer adaptado para espermatozoides e armazenados a -80 ºC até a data de envio para análise. As amostras foram enviadas via correio terrestre em temperatura ambiente após selagem a vácuo. A eficiência do processo de extração e envio foi confirmada por uma análise inicial realizada em um pool das amostras. A primeira etapa do método de transições MRM detectou a presença de 15 tipos de lipídios presentes nas amostras (a partir de uma seleção inicial de 66 metabólitos feita em bases de dados). A análise estatística dos dados obtidos na segunda etapa identificou 9 lipídios diferencialmente expressos entre os dois grupos, representados por 6 fosfolipídios (PC) e 3 esfingomielinas (SM), estando em maior abundância no grupo infértil, corroborando a relação existente entre lipídios espermáticos e a fertilidade masculina. O estudo evidencia que a padronização das técnicas de extração lipídica, armazenamento, envio dos extratos lipídicos, LC-MS/MS e transições MRM possibilitou a análise lipídica gamética de maneira rápida e sensível, utilizando pequenas quantidades de amostra. Com a exceção da PC (38:5), que foi previamente associada a uma maior fertilidade em estudos anteriores, todas as diferenças observadas foram consistentes com a literatura e contribuíram para uma melhor análise dos lipídios envolvidos com a infertilidade. Mais estudos utilizando essa mesma abordagem serão necessários para detectar possíveis biomarcadores individuais, sendo que as espécies lipídicas detectadas neste estudo (PC (34:0); PC (16:0); PC (34:2); PC (28:1); PC (36:2); SM (C18:0); SM (d18:1/16:1); SM C16:1(d18:0/16:1)) serão apontadas como os principais alvos.

Lipids play a key role in the sperm plasma membrane, assisting in the maintenance of its structural integrity and functionality and, thus, are directly related to the process of fertilization capacity. Despite its relevance, information on the lipid profile of human sperm cells is very limited. Therefore, the main objective of this study was to characterize the lipid content of spermatozoa of fertile men and infertile men with oligoasthenozoospermia using liquid chromatography coupled with mass spectrometry (LC-MS/MS) following a profiling step by monitoring multiple reactions (MRM-profiling). A prospective observational study where lipid extracts from seminal samples of 10 fertile and 10 infertile men were analyzed was performed. Lipid extracts were obtained using the Bligh & Dyer protocol adapted for spermatozoa and stored at -80 ºC until the date of submission for analysis. Samples were shipped via ground mail at room temperature after vacuum sealing. The efficiency of the extraction and shipping methods was confirmed by a preliminary analysis performed on with a pool of samples. The first stage of the MRM transitions method detected the presence of 15 lipid species in the samples (from an initial database selection of 66 metabolites). Statistical analysis of the data obtained in the second stage identified 9 lipids differentially expressed between the two groups, 6 phospholipids (PC) and 3 sphingomyelins (SM), all of them more abundant in the infertile group, suggesting a relationship between sperm lipids and male fertility. The study shows that the standardization of the techniques and methods used for lipid extraction, storage and shipping, as well as analysis via LC-MS/MS and MRM transitions allowed for a quick and sensitive lipid characterization of male gametes, using small amounts of sample. As for the results, with the exception of PC (38:5), which was previously associated with greater fertility in previous studies, all observed differences were consistent with the previous literature and, therefore, contributed to a better characterization of the lipids involved in infertility. More studies using this same approach will be needed to detect possible individual biomarkers, and the lipid species detected in this study (PC (34:0); PC (16:0); PC (34:2); PC (28:1) ; PC (36:2); SM (C18:0); SM (d18:1/16:1); SM C16:1(d18:0/16:1)) will be identified as the main targets.