CONTEXTO: Os tumores adrenocorticais (TACs) são raros e agressivos. YAP1, um efetor da via Hippo, é superexpresso em outros tipos de câncer. Recentemente, foi demonstrado que a superexpressão de YAP1 se associa com pior prognóstico de pacientes pediátricos com TAC. OBJETIVOS: Avaliar o papel do oncogene YAP1 e o efeito antitumoral de seu inibidor, a verteporfina, na tumorigênese adrenocortical. MÉTODOS: Ex vivo e in silico, a expressão do gene YAP1 em TACs foi analisada a partir de dados públicos disponibilizados nas bases de dados TCGA e GEO, bem como de dados resultantes do RNA-seq de amostras de TACs pediátricos da coorte FMRP/USP-Boldrini. Adicionalmente, o perfil de metilação do gene YAP1 foi analisado a partir dos dados de amostras de pacientes pediátricos da coorte FMRP/USP-Boldrini e de dados públicos no GEO. In vitro, o papel do YAP1 sobre a progressão de TACs foi examinado por meio de ensaios de viabilidade celular, ciclo celular, formação de colônias em ágar mole e invasão celular. A influência de YAP1 sobre a expressão proteica e a atividade transcricional da beta-catenina foi examinada por meio de Western blot, imunofluorescência e qPCR em tempo real. In vivo, foi avaliado o efeito da inibição farmacológica do YAP1 usando verteporfina sobre o crescimento tumoral em modelo xenográfico murino de TACs. RESULTADOS: Houve associação significativa entre a alta expressão de YAP1 com a menor sobrevida de pacientes pediátricos das coortes GEO e FMRP/USP-Boldrini e de pacientes adultos da coorte TCGA. Ainda, observou-se duas assinaturas de metilação de YAP1 nas coortes pediátricas avaliadas, sendo que houve associação entre estas assinaturas e o prognóstico dos pacientes da FMRP/USP-Boldrini. Juntos, estes resultados confirmam a importância do gene YAP1 neste processo. In vitro, a inibição do YAP1 reduziu a viabilidade celular através do bloqueio da progressão do ciclo celular na fase G0-G1, inibiu a expressão dos marcadores do processo de transição epitélio-mesênquima, assim como o crescimento independente de ancoragem e a invasão celular. Adicionalmente, o YAP1 modulou os níveis proteicos e a atividade transcricional da beta-catenina e, ao mesmo tempo, a beta-catenina mostrou-se mediadora parcial do efeito do YAP1 nas células adrenocorticais. Finalmente, in vivo, a verteporfina inibiu o crescimento tumoral por meio da inibição da proliferação tumoral, demonstrada pela imunorreatividade reduzida de Ki67 nos xenoenxertos de TAC nos animais tratados. CONCLUSÕES: Nossos achados reforçam o papel do YAP1 como um novo marcador prognóstico para pacientes com TAC, bem como demonstram a contribuição de sua desregulação no processo de tumorigênese adrenocortical. Este estudo evidencia a importância da interação entre as vias Hippo/YAP1 e Wnt/beta-catenina em células adrenocorticais. A demonstração do efeito antitumoral da verteporfina sugere que YAP1 pode ser um novo alvo para o tratamento de pacientes com TAC.

Background: Adrenocortical tumors (ACT) are rare and aggressive. YAP1, a HIPPO pathway effector, is overexpressed in other types of tumors. Recently, it was shown that YAP1 overexpression is associated with worse prognosis in pediatric patients with ACT. Objectives: To evaluate the role of the YAP1 oncogene and the antitumor effect of its inhibitor, verteporfin, in adrenocortical tumorigenesis. Methods: Ex vivo and in silico, the YAP1 expression in ACT was analyzed from publicly available data from TCGA and GEO databases and the RNA-seq data of pediatric patients' samples from FMRP/USP-Boldrini cohort. In addition, YAP1 methylation profile was analyzed from a methylation array from pediatric patients' samples from FMRP/USP-Boldrini cohort and public data from GEO. In vitro, the role of YAP1 on ACT progression was examined using cell viability, cell cycle, soft-agar colony formation, and cell invasion assays. YAP1's influence on beta-catenin protein levels and transcription activity was examined by immunoblotting, immunofluorescence and real time-qPCR. In vivo, the effect of the pharmacological inhibition of YAP1 by verteporfin on tumor growth was evaluated in a mouse xenograft model of ACT. Results: We confirmed the association between YAP1 mRNA overexpression with impaired survival of pediatric patients from GEO and FMRP/USP-Boldrini cohort and adult patients from TCGA. Moreover, we identified two YAP1 methylation signatures in both pediatric cohorts evaluated. These methylation signatures were also associated with the survival of pediatric patients from the FMRP/USP-Boldrini cohort. Together, these results support the prognostic marker value of YAP1 in ACTs. In vitro, the inhibition of YAP1 reduced adrenocortical cell viability through cell cycle arrestment in G0-G1 phase, inhibited the epithelial mesenchymal transition process markers' expression, as well as anchorage-independent growth and cell invasion. In addition, YAP1 was shown to modulate beta-catenin protein levels and transcription activity and, at the same time, beta-catenin was shown to partially mediate the effect of YAP1 on adrenocortical cells. Finally, in vivo, verteporfin inhibited the tumor growth by inhibiting tumor cell proliferation, as shown by reduced Ki67 immunoreactivity in the xenografts from treated mice. Conclusions: Our findings reinforce the role of YAP1 as a novel prognostic marker for patients with ACT, as well as demonstrate the mechanisms by which YAP1 deregulation contributes to adrenocortical tumorigenesis. This study also evidences the importance of the crosstalk between Hippo/YAP1 and Wnt/beta-catenin pathways in adrenocortical cells, which acknowledges YAP1 as a new target for the treatment of patients with ACT.