O trabalho aqui apresentado constituiu na padronização de um método para medida de atividade anticomplementar. Utilizou-se técnica cinética de fixação de complemento. Foram estudadas substâncias anticomplementares de atividade conhecida, como a gama globulina humana agregada pelo calor, heparina, endotoxina e zymosan além de uma fração ativa de veneno de sapo de ação sobre o complemento não totalmente esclarecida. O método como padronizado permitiu a determinação de parâmetros específicos e definidos que caracterizaram as substâncias atuantes preferentemente sobre a via clássica do complemento (gama globulina humana agregada, heparina e fração do veneno de sapo), porém não aplicado para aquelas que agem sobre a via alternativa (endotoxina e zymosan). As análises gráficas e matemáticas das relações entre quantidades de substâncias anticomplementar e porcentagens de inibição da atividade hemolítica do complemento, evidenciaram diferenças entre as substâncias testadas, possibilitando inferências sobre o mecanismo de interação com o complemento. As medidas feitas com quantidades variáveis de complemento ressaltaram a importância de se fixar um número definido de unidades hemolíticas em cada ensaio para torná-lo reprodutivo e comparável. Além disso foi possível demonstrar que há relação entre a dose para 50% de inibição da atividade do complemento e o número de unidades hemolíticas utilizado para sua medida. Desde que o emprego de solução preservadora de complemento poderia afetar a atividade hemolítica foram definidas as condições experimentais que permitem o uso de complemento preservado com solução de Richardson. O método padronizado se revelou de execução simples, não dispendioso, sensível e reprodutivo, capaz de detectar e medir a atividade de substâncias que interagem com o complemento, pela via clássica.

The present investigation concerns the standardization of a method for measuring anticomplement activity using kinetic techniques of complement fixation. Anticomplement substances of known activity were studied, such as heat-aggregated human gamma globulin, heparin, endotoxin and zymosan, as well as an active fraction of toad venom whose action on complement has not yet been fully elucidated. Standardization of the method permitted the determination of specific and defined parameters that characterize the substances which act preferentially on the classic complement pathway (aggregated human gamma globulin, heparin, and the toad venom fraction). The method, however, could not be applied to substances that act on the alternative pathway (endotoxin and zymosan). Mathematical and graphic analysis of the relationship between amount of anticomplement substance and percentage of inhibition of the hemolytic activity of complement showed differences between the substances tested, which permitted inferences on their mechanism of action on complement. Measurements carried out with varying amounts of complement showed the importance of fixing a defined number of hemolytic units in each assay for reproducibility and comparison purposes. In addition, it was possible to demonstrate a relationship between the dose needed for 50% inhibition of complement activity and the number of hemolytic units used for measurement. Since the use of complement preserving solutions may affect the hemolytic activity, we defined experimental conditions that permit the use of complement preserved in Richardson solution. The method standardized here was shown to be easy to carry out, inexpensive, sensitive and reproducible, and able to measure the activity of substances that interact with complement through the classic pathway.