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Tese de Doutorado
DOI
https://doi.org/10.11606/T.17.2021.tde-07022022-144430
Documento
Autor
Nome completo
Bruna Morais Faleiros de Paula
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
Ribeirão Preto, 2021
Orientador
Banca examinadora
Vannucchi, Helio (Presidente)
Fino, Carolina Nicoletti Ferreira
Cunha, Daniel Ferreira da
Ong, Thomas Prates
Título em português
Padrões de metilação e expressão de genes da inflamação e do metabolismo energético na prole de ratas submetidas à dieta suplementada com ácido fólico
Palavras-chave em português
Ácido fólico
Epigenética
Expressão gênica
Inflamação
Metabolismo energético
Metilação do DNA
Resumo em português
Introdução - A epigenética nutricional envolve mecanismos que são essenciais para o adequado desenvolvimento embrionário dos mamíferos, sendo que, alterações neste estágio podem levar a vários distúrbios metabólicos. Em condições saudáveis existe um equilíbrio entre esses processos e adequado metabolismo energético, entretanto a interrupção e/ou desequilíbrio da homeostase metabólica pode acarretar em várias patologias, como resistência à insulina, doenças cardiovasculares, obesidade, dentre outras. Objetivo - Investigar os padrões metilação, expressão gênica e proteica de genes envolvidos na inflamação e no metabolismo energético na prole de ratas submetidas às dietas deficiente e suplementada com ácido fólico. Materiais e métodos - O estudo envolveu filhotes (n=40) machos e fêmeas de ratos Wistar que foram desmamados com a mesma dieta de suas respectivas mães. Esses animais foram randomizados em três grupos de tratamento: grupo controle (2,0 mg de ácido fólico/kg de ração), grupo deficiente (0,5 mg de ácido fólico/kg de ração) e grupo suplementado (8 mg de ácido fólico/kg de ração). O peso destes animais e o consumo das rações foram aferidos três vezes por semana durante todo o tratamento, que totalizou 13 semanas. Foram coletadas amostras do fígado, tecido adiposo branco (TAB) e tecido adiposo marrom (TAM), a partir das quais foram extraídos RNA, DNA e proteína utilizando kits comerciais específicos. Com as referidas amostras biológicas foram realizadas análises de expressão gênica por reação em cadeia de polimerase (PCR); metilação do DNA por Pirosequenciamento e expressão proteica por Western Blotting. Resultados - Observou-se que filhotes machos do grupo deficiente, e as fêmeas do grupo suplementado, apresentaram maiores peso e ingestão alimentar que seus respectivos grupos controle. No fígado, a expressão gênica e proteica de Tnf-α, Pparg e Sirt foram maiores no grupo suplementado comparado ao grupo controle; Il1-β apresentou maior expressão gênica e proteica no grupo deficiente comparado ao grupo suplementado. No TAB, a metilação de Foxo1 foi menor e a expressão gênica foi maior no grupo suplementado comparado com o grupo controle; a metilção de Pparg foi menor no grupo deficiente comparado com o grupo controle; Il6 e Tnf-α apresentaram maior expressão gênica e proteica no grupo suplementado comparado ao grupo controle; Il1-β apresentou maior expressão gênica e proteica no grupo deficiente comparado ao grupo suplementado. No TAM, a expressão gênica e proteica de SIRT1 foi maior no grupo deficiente comparado ao grupo controle e suplementado; Pparg apresentou menor expressão gênica e proteica nos grupos suplementado e deficiente comparado ao grupo controle; Il1-β apresentou maior expressão gênica no grupo suplementado comparado ao grupo controle. Todos os resultados com nível de significância ≤ 0,05. Conclusão - A dieta suplementada com ácido fólico foi capaz de modular tanto os genes da inflamação quanto os do metabolismo energético na prole. Dessa forma, há a necessidade de mais estudos para fornecer melhor compreensão dos mecanismos moleculares relacionados à reprogramação epigenética fetal destes genes, bem como para o adequado fornecimento de ácido fólico durante o período de desenvolvimento embrionário/fetal e pós-desmame.
Título em inglês
Methylation and gene expression patterns of inflammation and energy metabolism in offspring of female rats fed a folic acid supplemented diet
Palavras-chave em inglês
DNA methylation
Energy metabolism
Epigenetics
Folic acid
Gene expression
Inflammation
Resumo em inglês
Background - Nutritional epigenetics involves mechanisms that are essential for the proper embryonic development of mammals, and alterations at this stage can lead to various metabolic disorders. In healthy conditions, there is a balance between these processes and adequate energy metabolism; however, the interruption and/or imbalance of metabolic homeostasis can lead to numerous pathologies, such as insulin resistance, cardiovascular diseases, obesity, among others. Objective - To investigate the methylation patterns, gene and protein expression of genes involved in inflammation and energy metabolism in the offspring of female rats submitted to folic acid deficient and supplemented diets. Materials and methods - The study involved male and female offspring (n=40) of Wistar rats that were weaned on the same diet as their respective mothers. These animals were randomized into three treatment groups: control group (2.0 mg folic acid/kg feed), deficient group (0.5 mg folic acid/kg feed) and supplemented group (8 mg folic acid /kg of feed). The weight of these animals and feed consumption were measured three times a week throughout the treatment, which totaled 13 weeks. Liver, white adipose tissue (WAT) and brown adipose tissue (BAT) samples were collected, from which RNA, DNA and protein were extracted using specific commercial kits. With these biological samples, gene expression analyzes were performed by polymerase chain reaction (PCR); DNA methylation by Pyrosequencing and protein expression by Western Blotting. Results - It was observed that male offspring from the deficient group and females from the supplemented group had higher weight and food intake than their respective control groups. In liver, gene and protein expression of Tnf-α, Pparg and Sirt were higher in the supplemented group compared to the control group; Il1-β showed higher gene and protein expression in the deficient group compared to the supplemented group. In WAT, Foxo1 methylation was lower and gene expression was higher in the supplemented group compared to the control group; Pparg methylation was lower in the deficient group compared to the control group; Il6 and Tnf-α showed higher gene and protein expression in the supplemented group compared to the control group; Il1-β showed higher gene and protein expression in the deficient group compared to the supplemented group. In BAT, gene and protein expression of SIRT1 was higher in the deficient group compared to the control and supplemented groups; Pparg showed lower gene and protein expression in the supplemented and deficient groups compared to the control group; Il1-β showed higher gene expression in the supplemented group compared to the control group. All results with a significance level ≤ 0.05. Conclusion - The folic acid supplemented diet was able to modulate both inflammation and energy metabolism genes in offspring. Thus, there is a need for further studies to provide a better understanding of the molecular mechanisms related to the fetal epigenetic reprogramming of these genes, as well as for the adequate supply of folic acid during the embryonic/fetal and post-weaning period.
 
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Data de Publicação
2022-02-16
 
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