• JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
 
  Bookmark and Share
 
 
Tese de Doutorado
DOI
https://doi.org/10.11606/T.17.2023.tde-08022024-122724
Documento
Autor
Nome completo
Allison Takeo Tsuge
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
Ribeirão Preto, 2023
Orientador
Banca examinadora
Júnior, Orlando de Castro e Silva (Presidente)
Escanhoela, Cecilia Amélia Fazzio
Sankarankutty, Ajith Kumar
Vollet Filho, José Dirceu
Título em português
Estudo da espectroscopia de fluorescência a laser em fígados de ratos com isquemia hipotérmica
Palavras-chave em português
Espectroscopia de fluorescência
Hepatectomia parcial
Hipotermia
Laserterapia
Regeneração hepática
Resumo em português
Introdução: Após hepatectomia parcial, o fígado remanescente apresenta resposta regenerativa, mantendo relação percentual com o hospedeiro. Não há dados precisos na literatura sobre viabilidade hepática após injúria tecidual durante preservação hipotérmica. A espectroscopia pode fornecer informações sobre tecidos por sua capacidade de mensurar a fluorescência, desde que haja estimulação adequada. Técnicas de espectroscopia têm sido investigadas como novos métodos para estudo e análise de parâmetros teciduais. Objetivo: Avaliar, em modelo experimental, a aplicabilidade da espectroscopia de fluorescência a laser no tecido hepático proveniente de hepatectomias, utilizando-se a proliferação celular (avaliada através de imunohistoquímica de Ki67) como controle. Objetivos secundários, comprovar, através desta técnica, a viabilidade do tecido hepático após 24h de hepatectomia parcial, em condições hipotérmicas. Analisar a regeneração do fígado remanescente após 24 horas de hepatectomia parcial. Verificar se irradiação com laser 660 nm aumenta a regeneração destes fígados. Métodos: 56 ratos Wistar foram divididos em quatro grupos de 14 animais: FTNP (fígado total não perfundido); FTP (fígado total perfundido); HPS (hepatectomia parcial a 70% in situ) e HPP (hepatectomia parcial a 70% perfundido ex situ). O tempo para estas análises teciduais foi de 0 e 24 horas. A perfusão hepática foi realizada com 250 ml de solução de preservação estática SPS-1. Em metade dos animais de cada grupo foi aplicado laser 660 nm. Foram realizadas análises utilizando-se um espectrofotômetro montado com dispositivos de laser emitindo comprimentos de onda em 405 nm e em 532 nm como fontes de excitação para captação de fluorescência. Para cada um foram realizadas quatro medidas do lobo lateral esquerdo. Feita a análise do tempo 0h (T0), sendo que nos grupos onde houve perfusão com SPS-1, esta leitura ocorreu imediatamente após a perfusão, e antes da aplicação de laser 660 nm. Nova leitura após 24 horas (T24). Em cada grupo de 14 animais, 7 tiveram o fígado irradiado com laser 660 nm em T0. Para a imunohistoquímica foi utilizado o anticorpo primário anti-Ki67. Análise e quantificação foram realizadas no microscópio óptico pela contagem do número de células imunomarcadas na objetiva de 40x (média 20 campos). Resultados: as análises de espectroscopia mostram a emissão de moléculas NADH, FAD e porfirinas, que emitem fluorescência nos comprimentos de onda de 464 nm, 535 nm e 630-690 nm, respectivamente. Os resultados de Ki67 inferem um aumento discreto (p=0,02) do marcador no subgrupo HPS com laser 660 nm, porém houve uma diminuição da regeneração hepática no subgrupo com laser 660 nm no grupo HPP. Conclusão: inferimos que a espectrometria de fluorescência pode ser utilizada para a análise de características da atividade e viabilidade celular em tempo real. Também inferimos presença de atividade metabólica nas amostras preservadas hipotermicamente (após 24h da hepatectomia parcial), mesmo em condições adversas à regeneração. Quando associados fatores hepatotróficos à injúria tecidual, o laser (660 nm) fornecido ao tecido hepático aumentou a atividade metabólica (processo regenerativo). Em condições hipotérmicas, sem fatores hepatotróficos ou injúria tecidual, o fornecimento de laser 660 nm ao tecido hepático não incrementou a atividade metabólica do mesmo.
Título em inglês
Study of laser fluorescence spectroscopy in livers of rats with hypothermic ischemia
Palavras-chave em inglês
Fluorescence spectroscopy
Hepatic regeneration
Hypothermia
Laser therapy
Partial hepatectomy
Resumo em inglês
Introduction: After partial hepatectomy, the remaining liver presents a regenerative response, maintaining a percentage relationship with the host. There are no precise data in the literature on liver viability after tissue injury during hypothermic preservation. Spectroscopy can provide information about tissues through its ability to measure fluorescence, provided there is adequate stimulation. Spectroscopy techniques have been investigated as new methods for studying and analyzing tissue parameters. Objective: To evaluate, in an experimental model, the applicability of laser fluorescence spectroscopy in liver tissue from hepatectomies, using cell proliferation (assessed through Ki67 immunohistochemistry) as a control. Secondary objectives are to prove, through this technique, the viability of liver tissue after 24 hours of partial hepatectomy, under hypothermic conditions. Analyze the regeneration of the remaining liver after 24 hours of partial hepatectomy. Check whether irradiation with a 660 nm laser increases the regeneration of these livers. Methods: 56 Wistar rats were divided into four groups of 14 animals: FTNP (total non-perfused liver); FTP (total liver perfused); HPS (70% partial hepatectomy in situ) and HPP (70% partial hepatectomy perfused ex situ). The time for these tissue analyzes was 0 and 24 hours. Liver perfusion was performed with 250 ml of SPS-1 static preservation solution. Half of the animals in each group received a 660 nm laser. Analyzes were carried out using a spectrophotometer prepared with laser devices emitting wavelengths at 405 nm and 532 nm as excitation sources for fluorescence capture. For each one, four measurements were taken of the left lateral lobe. The time 0h (T0) was analyzed, and in the groups where there was perfusion with SPS-1, this reading occurred immediately after perfusion, and before the application of 660 nm laser. New reading after 24 hours (T24). In each group of 14 animals, 7 had their livers irradiated with a 660 nm laser at T0. For immunohistochemistry, the anti-Ki67 primary antibody was used. Analysis and quantification were carried out under an optical microscope by counting the number of immunostained cells under a 40x objective (average 20 fields). Results: spectroscopy analyzes show the emission of NADH, FAD and porphyrin molecules, which emit fluorescence at wavelengths of 464 nm, 535 nm and 630-690 nm, respectively. The Ki67 results infer a slight increase (p=0.02) of the marker in the HPS subgroup with 660 nm laser, however there was a decrease in liver regeneration in the subgroup with 660 nm laser in the HPP group. Conclusion: we infer that fluorescence spectrometry can be used to analyze characteristics of cell activity and viability in real time. We also inferred the presence of metabolic activity in samples preserved hypothermally (after 24 hours of partial hepatectomy), even in conditions adverse to regeneration. When hepatotrophic factors are associated with tissue injury, the laser (660 nm) supplied to liver tissue increased metabolic activity (regenerative process). In hypothermic conditions, without hepatotrophic factors or tissue injury, the delivery of a 660 nm laser to the liver tissue did not increase its metabolic activity.
 
AVISO - A consulta a este documento fica condicionada na aceitação das seguintes condições de uso:
Este trabalho é somente para uso privado de atividades de pesquisa e ensino. Não é autorizada sua reprodução para quaisquer fins lucrativos. Esta reserva de direitos abrange a todos os dados do documento bem como seu conteúdo. Na utilização ou citação de partes do documento é obrigatório mencionar nome da pessoa autora do trabalho.
Data de Publicação
2024-03-25
 
AVISO: Saiba o que são os trabalhos decorrentes clicando aqui.
Todos os direitos da tese/dissertação são de seus autores
CeTI-SC/STI
Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP. Copyright © 2001-2024. Todos os direitos reservados.