Pertencente à família Flaviviridae, o vírus da Zika (ZIKV) é um flavivírus de importância médica, cujo principal agente transmissor são mosquitos da família Aedes. Outros arbovírus importantes estão incluídos no gênero Flavivirus, sendo os mais conhecidos o vírus da Dengue (DENV) e o vírus da Febre Amarela (YFV). Considerando os diversos relatos na literatura correlacionando este arbovírus ao comprometimento do sistema nervoso central (SNC), estudos que exploram a dinâmica intracelular do ZIKV, particularmente no que concerne à participação de fatores da célula hospedeira na propagação viral, são escassos. Deste modo, a primeira parte desta dissertação objetivou investigar a participação da maquinaria ESCRT (Endosomal Sorting Complex Required for Transport) na montagem e externalização de ZIKV. Esta maquinaria é responsável por mediar eventos intracelulares requerem deformação e fissão da membrana e já foi envolvida em processos que culminam na montagem e brotamento de diversos vírus envelopados, como alguns flavivírus. Por meio de ensaio de duplo híbrido mostramos que a proteína nãoestrutural 3 (NS3) de ZIKV interage com a proteína TSG101 (ESCRT-I), via domínio helicase de NS3. Para compreender a importância de TSG101 durante a infecção viral foi empregada técnica de small interfering RNA (siRNA) e a observação dos dados mostrou que a depleção de TSG101 não comprometeu a eficiência de replicação viral e externalização de partículas virais infecciosas de ZIKV. A maquinaria ESCRT também já foi reportada na literatura como sendo capaz de regular o tráfego da Proteína Precursora do β-amiloide (APP). A depleção de componentes ESCRT resultou na inibição da degradação de APP e promoveu o acúmulo de β-amiloide (Aβ), peptídeo neurotóxico resultante da clivagem proteolítica de APP. A maquinaria ESCRT também exerce no processo de autofagia, envolvida na depuração do fragmento C99, precursor do Aβ. Deste modo a segunda parte desta dissertação objetivou investigar o efeito da infeção pelo ZIKV no tráfego e processamento de APP. Nossos resultados indicaram que a infecção por ZIKV induz alterações nos níveis totais da proteína APP, além de acarretar na sua redistribuição intracelular. Como tentativa de elucidar a nossa hipótese de que a autofagia induzida pelo ZIKV seria responsável por desempenhar alterações na expressão, redistribuição subcelular e processamento de APP, foi testado o efeito as proteínas NS4A e NS4B de ZIKV, sabidamente indutoras de autofagia. Os dados obtidos demonstraram que a proteína NS4A de ZIKV colocaliza-se fortemente com APP e que ambas as proteínas virais são capazes de modificar a localização e processamento de APP, favorecendo a detecção de C99.

The Zika virus (ZIKV) is a flavivirus of medical importance belonging to the Flaviviridae family, whose main transmitting agents are mosquitoes of the Aedes family. Other important arboviruses are included in the genus Flavivirus, the best-known being Dengue virus (DENV) and Yellow Fever virus (YFV). Although of notable relevance in public health due to several reports in the literature correlating this arbovirus to severe clinical manifestations that trigger central nervous system (CNS) involvement, studies that explore the intracellular dynamics of ZIKV, particularly with regard to the participation of factors of the host cell in viral propagation, are scarce. Thus, the first part of this dissertation aimed to investigate the participation of ESCRT machinery (Endosomal Sorting Complex Required for Transport) in the assembly and budding of ZIKV. This machinery is responsible for mediating intracellular events that require membrane deformation and fission and has already been involved in processes that culminate in the assembly and budding of several enveloped viruses, such as some flaviviruses. Through a yeast two-hybrid, we showed that the ZIKV non-structural protein 3 (NS3) interacts with the TSG101 protein (ESCRT-I) via the NS3 helicase domain. The knockdown of TSG101 was performed, by small interfering RNA (siRNA), to understand the importance of this protein during viral infection. The data showed that TSG101 depletion did not compromise the efficiency of viral replication and externalization of infectious ZIKV particles. The ESCRT machinery has also been reported in the literature as being able to regulate β-amyloid Precursor Protein (APP) trafficking. The depletion of ESCRT components resulted in the inhibition of APP degradation and promoted the accumulation of β-amyloid (Aβ), a neurotoxic peptide resulting from the proteolytic cleavage of APP. The ESCRT machinery also plays a role in the process of autophagy, involved in the clearance of the C99 fragment, the precursor of Aβ. Thus, the second part of this dissertation aimed to investigate the effect of ZIKV infection on APP traffic and processing. Our results indicated that ZIKV infection induces changes in the total levels of the APP protein, in addition to causing its intracellular redistribution. In an attempt to elucidate our hypothesis that ZIKV-induced autophagy is responsible for changes in expression, subcellular redistribution and APP processing, the effect of ZIKV proteins NS4A and NS4B (known to induce autophagy), was tested. The data obtained demonstrated that the ZIKV NS4A protein co-localizes strongly with APP and that both viral proteins can modify APP's localization and processing, favoring the detection of C99.