O vírus sincicial respiratório humano (HRSV) é frequente causa de infecção respiratória aguda (IRA) em crianças. Em estudo anterior detectamos HRSV (por RTPCR em tempo real) em 15% das crianças com hipertrofia amigdaliana crônica sem sintomas de IRA, indicando que essas crianças podem ser portadoras silenciosas e saudáveis. Dados preliminares do laboratório incluem a detecção de proteínas estruturais do HRSV em células linfomononucleares de tonsilas e de linfonodos, incluindo linfócitos T CD4+ e B. O presente estudo visou a investigar os efeitos da infecção por HRSV especificamente em linfócitos B. Nosso objetivo foi analisar o impacto do HRSV na viabilidade celular e funcionalidade de linfócitos B infectados com HRSV. Confirmamos a presença de infecção natural em linfócitos B de tonsilas humanas, inclusive com formação de estruturas indicativas de corpos de inclusão. HRSV também infecta in vitro linfócitos B purificados de tonsilas humanas, também com formação de corpos de inclusão. Em seguida, estudamos a infecção por HRSV na linhagem de linfócitos B Jeko-1, e constatamos que ela é susceptível ao HRSV, com a presença de estruturas semelhantes a corpos de inclusão. A porcentagem de Jeko-1 infectada por HRSV determinada por citometria de fluxo 24h e 240h após a infecção foi de 40% e 4%, respectivamente. A infecção por RSV não reduziu significantemente a viabilidade de células Jeko-1. Os dados indicam que embora haja acúmulo de RNA viral nas células, isso não se reflete em aumento correspondente no sobrenadante. De modo inusitado, a dosagem por real-time PCR dos RNAs mensageiros virais mostrou ausência quase completa de RNAm para a proteína L. A secreção de citocinas no sobrenadante de células Jeko-1 infectadas HRSV mostrou ser diferente de células inoculadas com mock, especialmente evidenciado por aumento na secreção de IL-6, IL-10 e TNF-α nas células infectadas. O presente modelo in vitro de infecção de linhagem de célula B por HRSV ratifica a capacidade do HRSV de infectar linfócitos B, com formação de fábricas virais, porém com permissividade comprometida, favorecendo uma infecção pouco produtiva e de longa duração.

Human respiratory syncytial virus (HRSV) is a frequent cause of acute respiratory infection (ARI) in children. In a previous study, we detected HRSV (by realtime RT-PCR) in 15% of children with chronic tonsillar hypertrophy without ARI symptoms, indicating that these children may be silent healthy carriers. Preliminary laboratory data evidenced detection of HRSV structural proteins in lymphomononuclear cells of tonsils and lymph nodes, including CD4+ T and B lymphocytes. The present study aimed to investigate the effects of HRSV infection specifically on B lymphocytes, the impact of HRSV on viability and functionality of HRSV-infected B lymphocytes. We confirmed the presence of natural infection in human tonsil B lymphocytes, including formation of structures indicative of inclusion bodies. HRSV also infects in vitro purified B lymphocytes from human tonsils, also with formation of inclusion bodies. Next, we studied the HRSV infection in the Jeko-1 B lymphocyte lineage, and found that it is susceptible to HRSV, with the presence of inclusion body-like structures. The percentage of HRSV-infected Jeko-1 determined by flow cytometry 24h and 240h after infection was 40% and 4%, respectively. RSV infection did not significantly reduce the viability of Jeko-1 cells. The data indicate that although there is accumulation of viral RNA in the cells, this is not reflected in a corresponding increase of virus RNA progeny in the supernatant. Unexpectedly, the real-time PCR measurement of viral messenger RNAs showed almost complete absence of RNAm for the L protein. The secretion of cytokines in the supernatant of HRSV infected Jeko-1 cells showed to be different from mock inoculated cells, especially evidenced by increased secretion of IL-6, IL-10 and TNF-α in infected cells. The present in vitro model of B cell lineage infection by HRSV confirms the ability of HRSV to infect B lymphocytes, with the formation of viral factories, but with compromised permissiveness, favoring an unproductive and long-lasting infection.