O emprego das CEM (células estromais mesenquimais multipotentes) tem sido considerado uma alternativa terapêutica potencialmente promissora em diversos estudos pré-clínicos e clínicos. O grande interesse das CEM para a terapia celular deve-se a uma série de características, tais como, facilidade de obtenção a partir de diversos tecidos e baixa imunogenicidade, podendo ser empregadas em transplantes alogênicos. Diversos órgãos e tecidos são apontados como fontes potenciais das CTM, destacando-se mais recentemente o tecido adiposo. Em função destes aspectos, busca-se com este projeto a proposição de uma metodologia para proliferação de CEM de tecido adiposo humano em biorreator tipo tanque agitado, visando estabelecer um sistema de proliferação robusto que concilie a eficiência no rendimento celular com um menor prejuízo à qualidade genética do cultivo. Para isso foram conduzidos experimentos em cultura estática, e suspensão de menor escala (frasco spinner) e larga escala (biorreator). Os resultados demonstraram a ausência de influência do volume de meio de cultura sobre o rendimento do cultivo celular em cultura estática. No desenvolvimento de um protocolo de cultivo em frasco spinner os resultados definiram a concentração celular inicial de 30:1 (2,4 x 104 células/mL), regime de adesão celular intermitente a 70 rpm, 10% de SFB no meio de cultura com renovação de 50% do meio a cada 72 h, microcarregador Cultispher-S em 1 g/L e velocidade de agitação de 50 rpm na fase proliferativa. A seguir foi otimizado o cultivo em larga escala em biorreator, que após um delineamento gradual de cada variável do bioprocesso ficou definido como sendo com: concentração celular inicial de 15:1 (1,2 x 104 células/mL), regime de adesão celular intermitente a 70 rpm, 10% de SFB no meio de cultura com renovação de 25% do meio a cada 48 h, velocidade de agitação de 50 rpm na fase proliferativa, pH 7,3, temperatura a 36,5° C, microcarregador Cultispher-S em 1 g/L e concentração de oxigênio dissolvido crescente de 20 a 40% (72 h para intervalo de ajuste). Os cultivos em biorreator também foram avaliados quanto a sua integridade genômica através do ensaio cometa que demonstrou senescência progressiva das células em cultivo e do teste do micronúcleo que foi similar a situação controle do início do cultivo. O trabalho demonstra que avaliações da integridade genômica do cultivo de CEM devem se tornar corriqueiras, para assim atestar confiabilidade à utilização das células proliferadas em larga escala para terapia celular.

The use of MSC (multipotent mesenchymal stromal cells) has been considered a potentially promising therapeutic alternative in several preclinical and clinical studies. The great interest of MSC for cell therapy is due to a series of characteristics, such as ease of obtaining from different tissues and low immunogenicity, which can be used in allogeneic transplants. Several organs and tissues are identified as potential sources of MSC, with more emphasis on adipose tissue. In view of these aspects, this project seeks to propose a methodology for the proliferation of MSC of human adipose tissue in a stirring-tank bioreactor, aiming to establish a robust proliferation system that reconciles the efficiency in cell yield with a lesser loss to quality cultivation genetics. For this, experiments were conducted in static culture, and suspension of a smaller scale (spinner flask) and large scale (bioreactor). The results demonstrated the absence of influence of the volume of culture medium on the yield of cell culture in static culture. In the development of a spinner flask culture protocol, the results defined the initial cell concentration of 30:1 (2.4 x 104 cells/mL), intermittent cell adhesion regime at 70 rpm, 10% FBS in the culture medium with 50% renewal of the medium every 72 h, Cultispher-S microcarrier at 1 g/L and 50 rpm agitation speed in the proliferative phase. Next, large-scale cultivation in a bioreactor was optimized, which after a gradual design of each bioprocess variable was defined as: initial cell concentration of 15: 1 (1.2 x 104 cells/mL), cell adhesion regime intermittent at 70 rpm, 10% FBS in the culture medium with 25% renewal of the medium every 48 h, shaking speed of 50 rpm in the proliferative phase, pH 7.3, temperature at 36.5 ° C, Cultispher-S microcarrier at 1 g/L and dissolved oxygen concentration increasing from 20 to 40% (72 h for adjustment interval). Cultures in a bioreactor were also evaluated for their genomic integrity through the comet assay that demonstrated progressive senescence of the cells under cultivation and the micronucleus test that was similar to the control situation at the beginning of the cultivation. The work demonstrates that assessments of the genomic integrity of the MSC culture must become commonplace, in order to attest to the reliability of the large-scale use of proliferated cells for cell therapy.