O DNA fetal livre de células na circulação materna é uma fonte de material genético fetal para o diagnóstico pré-natal não invasivo. Em algumas situações, como aneuploidias fetais e pré-eclâmpsia, não basta detectar a presença ou ausência de um alelo no feto, tornando necessária a mensuração acurada da concentração do DNA fetal circulante no plasma materno. Marcadores InDels apresentam-se adequados nesse contexto por permitirem análises com amplicons curtos e amplificação em amostras com DNA degradado ou fragmentado. O objetivo do presente trabalho foi demonstrar que primers complementares às sequências inserção exclusivas fetais, em conjunto com primers flanqueadores, possibilitam a quantificação do DNA fetal livre, por PCR em Tempo Real. As condições laboratoriais de quatro marcadores previamente descritos (MID-1039, MID-856, L13 e L19) foram determinadas para quantificação por qPCR. Três deles apresentaram eficiência e especificidade adequadas para análises do DNA fetal. A concentração do DNA fetal livre foi mensurada no plasma de 23 parturientes informativas, ou seja, aquelas em que o genótipo materno é del/del e o fetal é in/del. O DNA total livre (materno e fetal) foi mensurado com primers para sequências do gene β-actina. A fração de DNA fetal variou de 5,05% a 45,0% do total de DNA circulante no plasma, com média de 16,58% e mediana de 12,39%. A metodologia aqui descrita poderá ser empregada em situações do diagnóstico pré-natal não invasivo ou em complicações gestacionais que exijam a análise quantitativa do DNA fetal, sem riscos ao feto e à mãe.

Cell-free fetal DNA in the maternal circulation is a source of fetal genetic material for noninvasive prenatal diagnosis. In some situations such as fetal aneuploidies and preeclampsia, it is not enough to detect the presence or absence of a fetus allele, making it necessary to accurately measure the concentration of circulating fetal DNA in maternal plasma. InDel markers are appropriate in this context because they allow analyses with short amplicons and amplification in samples with degraded or fragmented DNA. The present project aimed to demonstrate that primers complementary to exclusive fetal insertion sequences, together with flanking primers, allow the quantification of free fetal DNA by Real-Time PCR (qPCR). We determined the laboratory conditions for qPCR quantification of four previously described markers (MID-1039, MID-856, L13 and L19). Three of them showed adequate efficiency and specificity for fetal DNA analysis. We measured the concentration of free fetal DNA in the plasma of 23 informative parturients, that is, those with del/del as maternal genotype and in/del as the fetal. Free total DNA (maternal and fetal) was measured with primers for β-actin gene sequences. The fetal DNA fraction ranged from 5.05% to 45.0% of total circulating plasma DNA, with average of 16.58% and median of 12.39%. The methodology described here may be used in situations of non-invasive prenatal diagnosis or in gestational complications that require quantitative analysis of fetal DNA, without risks to fetus and mother.