O desenvolvimento renal em ratos e camundongos começa por volta do 11º ou 12º dia de vida intra-uterina e continua até a segunda semana após o nascimento. A formação de matriz extracelular (MEC) representa um dos eventos-chave na diferenciação de glomérulos. Várias linhas de evidências experimentais mostram que o sistema-renina-angiotensina (SRA) participa do desenvolvimento renal. Muitos sinais são transmitidos da superfície celular para o núcleo através da cascata das MAP (Mitogenic-Activated Protein) quinases. Esse estudo visa avaliar a expressão das MAP quinases no córtex renal durante o desenvolvimento renal pós-natal e a participação da AII na ativação dessas vias nos filhotes de mães submetidas à uma dieta com conteúdo elevado de sódio ou à exposição ao losartan durante a gestação e amamentação ou somente durante a amamentação. Analisamos também os efeitos desses tratamentos na estrutura e na função renal. Os filhotes de ratas Wistar de 1, 7, 15 e 30 dias foram divididos em 3 estudos com 2 sub-grupos em cada um: Estudo 1- Controle 1 (C1): filhotes de mães com ingestão normal de NaCl, Experimental 1 (E1): filhotes de mães submetidas à ingestão de solução salina 0,15 M; Estudo 2- Controle 2 (C2): filhotes de mães que receberam solução sacarose 2% durante a gestação e amamentação; Experimental 2 (E2): filhotes de mães que receberam losartan (0,4 g/L) diluído em solução de sacarose 2% durante a gestação e amamentação e Estudo 3- Controle 3 (C3): filhotes de mães que receberam solução sacarose 2% durante a amamentação, Experimental 3 (E3): filhotes de mães que receberam losartan (0,4 g/L) diluído em solução de sacarose 2% durante a amamentação. Os filhotes foram sacrificados em diferentes períodos após o nascimento (1, 7, 15 e 30 dias) e os rins retirados para análise histológica, imunohistoquímica, TUNEL e estudos de Western blot. As avaliações das reações imunohistoquímicas para α-SMA, fibronectina, p-ERK e p-JNK foram feitas através de escores que refletiam a extensão da área com imunorreação. Foram contadas as células PCNA e AII positivas e células apoptóticas por glomérulo e por área de córtex renal de 0,245 mm2. A análise da densitometria das bandas obtidas nos estudos de Western blot para AT 1, AT 2, p-p38 e tubulina foi realizada utilizando-se o programa lmage J. As expressões de α-SMA, fibronectina, PCNA, AII e p-ERK no córtex renal foram maiores no primeiro dia após o nascimento e diminuíram com o desenvolvimento renal. No estudo 1, verificamos redução nas expressões de α-SMA, fibronectina e PCNA no córtex renal dos animais de 1 dia de mães submetidas à dieta com alto conteúdo em sódio quando comparados aos controles de mesma idade. Estas alterações foram acompanhadas por redução no número de células AII positivas no córtex renal desses animais. A expressão de p-ERK foi menor no córtex renal dos animais de 1 dia do grupo E1 comparados aos controles, enquanto que as expressões das MAP quinases p-JNK e p-p38 foram maiores no córtex renal dos animais de 30 dias do grupo E1 quando comparados aos controles. Nestes animais também foi verificado maior número de células apoptóticas. Os animais de 30 dias deste grupo apresentaram redução na taxa de filtração glomerular (TFG) e aumento da pressão arterial quando comparados aos controles de mesma idade. A expressão de receptores AT 1 estava reduzida e a de AT 2 aumentada no córtex renal dos animais de 1 e 30 dias do grupo E1. O tratamento com losartan durante a gestação e amamentação (Estudo 2), bem como durante a amamentação (Estudo 3) provocou aumento das expressões de α-SMA, fibronectina, PCNA e o número de células apoptóticas no córtex renal dos animais de 15 e 30 dias em relação aos respectivos controles. Os animais de 30 dias do grupo E2 apresentaram também redução da expressão de receptores AT 1 e aumento de receptores AT 2, e alterações na estrutura renal caracterizadas pelo alargamento do espaço intersticial do córtex renal, atrofia e dilatação tubulares. A excreção urinária de albumina estava bastante elevada nos animais de 30 dias do grupo E2. Concluindo, as alterações de estrutura e função renal observadas nos filhotes de mães submetidas a tratamentos que interferem com a atividade do SRA, estavam associadas com as modificações nas expressões dos receptores AT1 e AT2 de AII e de MAP quinases durante o desenvolvimento renal pós-natal.

Renal development in rats and mice usually begins around the 11st and 12nd day of intrauterine life and continues until postnatal second week. Extracellular matrix (ECM) production has an important role on the glomerular differentiation process. Experimental evidences suggest that angiotensin II (AII) participates on postnatal renal development. Many signals are transmitted from cellular surface to the nucleus through MAPK (Mitogenic-Activated Protein Kinase) cascade. Several effects of AII are related to the activation of these pathways. The aim of this study was evaluate the MAPK expression on the renal cortex during postnatal renal development and the role of AII on the activation of these pathways in rats born from mothers submitted to high salt intake or exposed to losartan during gestation and lactation or during lactation. We also analyzed the effects of those treatments on renal structure and function. Newborn Wistar rats aging 1, 7, 15 and 30 days old were divided into 6 groups for performing of 3 studies: Study 1: Control 1 (C1 ), newborn rats from mothers that received normal salt intake; Experimental 1 (E1), newborn rats from mothers that received increased salt intake; Study 2: Control 2 (C2), newborn rats from mothers exposed to sacarose 2% solution during gestation and lactation; Experimental 2 (E2), newborn rats from mothers exposed to losartan (0,4 g/L) diluted in sacarose 2% solution during gestation and lactation; Study 3: Control 3 (C3), newborn rats from mothers exposed to sacarose 2% solution during lactation; Experimental 3 (E3), newborn rats from mothers exposed to losartan (0,4 g/L) diluted in sacarose 2% solution during lactation. Pups rats were killed and kidneys removed for histological and immunohistochemical studies, evaluation of apoptotic cells by TUNEL and Western blot analysis. The evaluation of α-SMA, fibronectin, p-ERK and p-JNK reactions was performed by scores which reflected mainly the changes in the extent rather than intensity of staining, and number of PCNA, AII and apoptotic positive cells were counted the by glomerulus or grid fields from renal cortex measuring 0.245mm2. Densitometry analysis of bands from Western blot studies for AT 1, AT 2, p-p38 and tubulin was performed using the lmage J computerized program. α-SMA, fibronectin, PCNA, AII and p-ERK expressions in renal cortex were higher on 1 day-old animal and decreased with the renal development. ln study 1, we verified reduced expressions of α-SMA, fibronectin and PCNA on renal cortex of 1 day-old animals from mothers submitted to increased salt intake when compared to the controls of same age. These alterations were associated with the reduction of AII positive cells on renal cortex of these animals. p-ERK expression was lower on renal cortex of 1 day-old animals from E1 group compared to the controls, while p-p38 and p-JNK MAPK expressions were higher on the renal cortex of the 30 day-old animals from E1group when compared to the controls of same age. We also observed higher number of apoptotic cells in renal cortex from these animals. Thirty days-old animals from this group also showed reduction in glomerular filtration rate (GFR) and an increase in blood pressure when compared to the controls of the same age. One and 30 day-old animals from E1 group presented reduction of AT 1 receptor and increase of AT 2 receptor expressions in renal cortex. The treatment with Losartan during gestation and lactation (Study 2) and during lactation (Study 3) provoked increase in fibronectin, PCNA and α-SMA expressions as well in the number of apoptotic cells on renal cortex from 15 and 30 day-old animals compared to the respective contrais. Thirty day-old animals from E2 and E3 groups showed a reduction in AT 1 and an increase in AT 2 expressions, and intense alterations on renal structure characterized by widening of interstitial space of renal cortex, atrophy and tubular lumen dilatation. Moreover, albumin urinary excretion of the 30 days-old animals was noticeably increased. ln conclusion, renal structure and function alterations observed in newborn rats from mothers exposed to treatments that interfere with the activity of RAS was associated with modifications on AT 1 and AT 2 receptors and MAPK expressions during postnatal renal development.