É bem estabelecido que a proteína ligante ao elemento responsivo de AMPc (CREB) associada ao seu coativador transcricional do tipo 2 (CRTC-2) exerce um papel chave na indução do programa gênico da neoglicogênese hepática, em resposta ao glucagon. Entretanto, muito pouco se conhece sobre o papel do Sistema Nervoso Simpático (SNS) na modulação deste complexo transcricional e seus efeitos fisiológicos resultantes. O trabalho teve como objetivo investigar a participação de CREB/CRTC-2 na ativação do programa gênico da neoglicogênese hepática induzida pela inervação simpática, durante o estresse térmico, em camundongos. Inicialmente, investigou-se a arquitetura da inervação noradrenérgica do fígado de camundongos (C57Bl6J) machos pela técnica de 3DISCO (Imagens 3D de órgãos clareados com solvente) constatou-se que os nervos simpáticos ficam restritos à vasculatura. Em paralelo, camundongos foram simpatectomizados (6-hidroxidopamina; 100 mg.kg-1.dia-1; T0, T2 e T7 dia de vida pós-natal; i.p) ou tratados com salina. Após 8-10 semanas, os animais foram expostos ao frio (4ºC) ou mantidos em temperatura ambiente, por 3 e 6 horas. O fígado foi extraído para a quantificação de proteínas por Western blot e análise gênica por RT-PCR. A atividade transcricional de CREB in vivo foi avaliada por meio de camundongo repórter CRE-luciferase. Os resultados foram expressos em média ± EPM e submetidos à análise estatística apropriada (p<0,05). A exposição ao frio aumentou a glicemia, o conteúdo hepático de noradrenalina e de PEPCK, uma enzima chave da neoglicogênese, bem como a fosforilação e atividade transcricional in vivo de CREB e de defosforilação de Ser275 CRTC-2. Todos esses efeitos foram abolidos ou atenuados pela simpatectomia. Verificou-se também que a exposição ao frio estimulou as cascatas de sinalização do AMPc e do Ca2+ e que a simpatectomia só foi capaz de modular proteínas relacionadas à via do Ca2+. Embora FoxO, assim como CREB, esteja também ativo no fígado de animais expostos ao frio, este fator transcricional não é modulado pelo SNS. Em conjunto, os dados indicam que CREB/CRTC-2 participam da ativação do programa gênico da neoglicogênese hepática induzida pela inervação simpática, durante o estresse térmico agudo.

It is well established that the cAMP responsive element-binding protein (CREB) associated with its coactivator type 2 (CRTC-2) it is the key of activation of gluconeogenesis program in glucagon response. However, very little is known about the role of the Sympathetic Nervous System (SNS) in the modulation of this transcriptional complex and its resulting physiological effects. The work aimed to investigate the participation of CREB/CRTC-2 in the activation of the gene program of hepatic gluconeogenesis induced by sympathetic innervation, during cold stress, in mice. Initially, the architecture of noradrenergic innervation of the liver of male mice (C57Bl6J) was investigated by the 3DISCO (3D imaging of solvent-cleared organs) technique and it was found that the sympathetic nerves are restricted to the vasculature. In parallel, mice were sympathectomized (6-hydroxydopamine; 100 mg.kg-1.day-1; T0, T2 and T7 day of postnatal life; i.p) or treated with saline. After 8-10 weeks, the animals were exposed to cold (4ºC) or at room temperature, for 3 and 6 hours. The liver was extracted for protein quantification by Western blot and gene analysis by RT-PCR. The transcriptional activity of CREB in vivo was evaluated using mouse reporter CRE-luciferase. The results were expressed as mean ± SEM and submitted to appropriate statistical analysis (p<0.05). Cold exposure increased blood glucose, hepatic norepinephrine and PEPCK content, a key enzyme in gluconeogenesis, as well as phosphorylation and transcriptional activity in vivo of CREB and dephosphorylation of Ser275 CRTC-2. All of these effects have been abolished or attenuated by sympathectomy. It was also found that exposure to cold stimulated the signaling cascades of cAMP and Ca2+ and that sympathectomy was only able to modulate proteins related to the Ca2+ pathway. Although FoxO is also active in the liver of animals exposed to cold, this transcriptional factor is not modulated by the SNS. Together, the data indicate that CREB/CRTC-2 participates in the activation of the gene program of hepatic gluconeogenesis induced by sympathetic innervation, during acute cold stress.