O desenvolvimento da dor neuropática envolve mudanças nas características dos neurônios que sinalizam a dor, bem como ao longo de todo o neuro-eixo. A sensação de dor persistente e a inflamação são observadas em diferentes condições clínicas que levam ao desenvolvimento da dor neuropática. Neste contexto, quimiocinas e seus receptores são amplamente expressões por células não neuronais e neuronais e possuem um papel na regulação da migração de células imunes. A via de sinalização CCL2/CCR2 contribui para a o desenvolvimento da dor neuropática em diversos modelos de indução de dano no sistema nervoso. Apesar disso, existem controvérsias acerca do tipo celular responsável pela produção de CCL2 no microambiente sensorial. Dessa forma, este estudo teve o objetivo de avaliar o papel da CCL2 no desenvolvimento da dor neuropática, com ênfase nos neurônios sensoriais periféricos. Foi realizada a validação do modelo de indução de lesão neuronal SNI por meio da avaliação de genes relacionadas à lesão no GRD e medula espinal, bem como a expressão de CCL2 nesses tecidos após a lesão ao longo do tempo. Validamos a participação da CCL2 na dor neuropática SNI por meio da avaliação comportamental nocifensiva de animais deficientes para a expressão de CCL2 e por meio da reanálise de sequenciamento de células únicas de GRD e meninges de camundongos e ratos saudáveis. Analisamos o papel dos neurônios sensoriais na produção de CCL2 por meio da avaliação comportamental nocifensiva de animais Nav1.8CRECCL2fl/fl. Avaliamos a expressão de CCL2 em outras células do microambiente somatossensorial, tais como micróglia e macrófagos por meio da reanálise de bancos de dados de sequenciamento de células únicas em modelo de neuropatia SNI e lesão por esmagamento. O papel do receptor CCR2 foi analisado por meio da avaliação comportamental nocifensiva de animais deficientes para a expressão de CCR2. O recrutamento de leucócitos foi avaliado por microscopia confocal das meninges. O estudo foi realizado sob aprovação do Comitê de Ética (05/2019). Os resultados obtidos demonstraram que o modelo de SNI modula aumenta a expressão de diferentes genes marcadores de lesão neuronal e ativação macrofágica no GRD e de lesão da medula espinal ao longo do tempo. Ademais, o modelo de SNI é capaz de aumentar a expressão de CCL2 no GRD e na medula espinal ao longo do tempo. A deficiência de CCL2 e CCR2 diminuem a resposta mecânica e térmica ao frio, no entanto a depleção condicionada de CCL2 nos neurônios não modifica essas respostas. A análise dos diferentes bancos de dados sugere um enriquecimento da expressão de CCL2 nos macrófagos residentes do GRD, na micróglia e em macrófagos da meninge. Por fim, o modelo de SNI é capaz de levar ao recrutamento de leucócitos CCR2+ para as meninges. Dessa forma, concluímos que a CCL2 parece estar sendo produzia pelos macrófagos ganglionares e contribui para o infiltrado de células CCR2+ nas meninges de forma parácrina.

Neuropathic pain involves changes in the characteristics of neurons that signal pain as well as along the entire neuro-axis. Persistent pain sensation and inflammation are shown in different clinical conditions and contribute to development of neuropathic pain. In this context, chemokines and their receptors are widely expressed by nonneuronal and neuronal cells and play a role in regulating immune cell migration. The CCL2/CCR2 pathway contributes to neuropathic pain in several models of nervous system injury. However, there are controversies regarding the cell type responsible for the release of CCL2 in the sensory microenvironment. Thus, this study aimed to evaluate the role of CCL2 in the neuropathic pain, with emphasis on peripheral sensory neurons. Validation of SNI model was performed by evaluating injury-related gene in DRG and spinal cord. CCL2 was evaluated in these tissues after injury over time. We validated the participation of CCL2 in SNI model by evaluating pain behavior in CCL2- deficient mice. CCL2 tissue expression was assessed by reanalysis of single cell sequencing databases of DRG and meninges from healthy mice and rats. We analyzed the role of sensory neurons in the production of CCL2 by conditional CCL2-depleted mice (Nav1.8+CCL2fl/fl). We evaluated CCL2 expression in other cell types, such as microglia and macrophages, by reanalysis of single cell sequencing databases in nerve crush and SNI models. The role of CCR2 was analyzed by evaluating pain behavior in CCR2-deficient mice. Leukocyte recruitment from meninges was assessed by confocal microscopy. The study was carried out with the approval of the Ethics Committee (05/2019). The results showed that there is alteration in the expression of different gene markers of neuronal injury and macrophage activation in DRG and spinal cord during SNI over time. Both CCL2 and CCR2 depletion decrease mechanical and thermal response. However, conditional depletion of CCL2 in neurons does not modify these responses. The analysis of different databases suggests an enrichment of CCL2 expression in resident macrophages from DRG, microglia and meningeal macrophages. Finally, It was shown recruitment of CCR2+ leukocytes to the meninges. Thus, we conclude that CCL2 seems to be produced by ganglionic macrophages and contributes to the infiltration of CCR2+ cells in the meninges.