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Mémoire de Maîtrise
DOI
https://doi.org/10.11606/D.17.2004.tde-10052021-115953
Document
Auteur
Nom complet
Ricardo José de Mendonça
Unité de l'USP
Domain de Connaissance
Date de Soutenance
Editeur
Ribeirão Preto, 2004
Directeur
Jury
Coutinho Netto, Joaquim (Président)
Frade, Marco Andrey Cipriani
Rodrigues, Vanderlei
Titre en portugais
Caracterização biológica de uma fração angiogênica do látex natural da seringueira Hevea brasiliensis
Mots-clés en portugais
Angiogênese
Hevea brasiliensis
Látex
Permeabilidade vascular
Purificação de proteínas
Resumé en portugais
O aumento da permeabilidade vascular e a angiogênese são importantes etapas do processo de cicatrização, crescimento de tumores e na revascularização de tecidos submetidos à isquemia. O aumento da permeabilidade vascular permite que diversas macromoléculas, como fibrinogênio e fatores de crescimento, alcancem o tecido lesado, enquanto a angiogênese amplia o suprimento de nutrientes e a remoção de resíduos metabólicos do tecido. Vários trabalhos têm sugerido que o látex extraído da seringueira Hevea brasiliensis possui atividade angiogênica. Iniciou-se, assim, esforços no sentido de purificar o(s) componentes(s) ativo(s) presente(s) neste material e caracterizá-lo(s), afim de comprovar seus efeitos no processo de cicatrização. O soro extraído do látex foi submetido a tratamentos desnaturantes (fervura e proteólise) e analisado quanto à sua capacidade de aumentar a permeabilidade vascular, o que indicou a natureza proteica do material ativo. Ensaios angiogênicos em membranas cório-alantóideas (MCAs) de embriões de galinha (Gallus domesticus) mostraram que o soro estimula a angiogênese. Em uma primeira etapa, a purificação do soro em coluna de DEAE-celulose, gerou três frações que foram dialisadas e liofilizadas. O pico I mostrou-se a fração mais ativa em aumentar a permeabilidade vascular, e na indução de angiogênese. Estudos histológicos mostraram que MCAs, tratadas com soro ou pico I, são mais espessas do que o controle, indicando, principalmente, uma maior deposição da matriz extracelular. Em uma segunda etapa de purificação em coluna de CM-celulose foram obtidas três novas frações, a partir do pico I. Porém, na análise de atividade destas, não foi possível concluir sobre qual das frações, foi a mais ativa. Em conjunto, estes resultados suportam a aceleração do processo cicatricial observado em estudos clínicos realizados com biomembrana de látex natural.
Titre en anglais
Biological characterization of an angiogenic fraction of the natural latex of the rubber tree Hevea brasiliensis
Mots-clés en anglais
Angiogenesis
Hevea brasiliensis
Latex
Protein purification
Vascular permeability
Resumé en anglais
The increase in vascular permeability and angiogenesis are crucial events to wound repair, tumoral growth and revascularization of tissues submitted to ischemia. An increased vascular permeability allows that a variety of cytocins and growth factors reach the damaged tissue. Nevertheless, the angiogenesis supply tissues with a wide variety of nutrients and also is important to metabolites clearance. It has been suggested that the latex from Hevea brasiliensis posses angiogenic activity Than, the purpose of this work was to purify and characterization of active compound, in order to demonstrate its angiogenic activity and its effects on vascular permeability. The crude latex was submitted to purification on a DEAE-cellulose column and eluted with stepwise gradient of NH4HCO3/NaCI buffer. Three fractions were obtained and submitted to dialysis and liophilization. The effects of these fractions on the vascular permeability were analyzed according Miles method. The angiogenic activity was analyzed using the chorioallantoic membranes from Gallus domesticus eggs. The fraction one (pico I) has the most evident angiogenic effect and is the most effective in enhancing vascular permeability. Moreover, the crude latex and fractions were boiled and treated with proteases in order to analyze their chemical characteristics. These samples lost part of their effects on vascular permeability, indicating a proteic nature of the active(s) compound(s). Also in this work, we have improve the purification status of fraction one using a CM-cellulose column, employing a stepwise gradient of NH4HCO3. buffer. These results are according with the enhancement of the wound healing observed in clinical trials carried out with biomembrane of natural latex.
 
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001411279.pdf (3.16 Mbytes)
Date de Publication
2021-05-10
 
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