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Dissertação de Mestrado
DOI
10.11606/D.17.2016.tde-09092015-110529
Documento
Autor
Nome completo
Ana Carla Medeiros
E-mail
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
Ribeirão Preto, 2015
Orientador
Banca examinadora
Gomes, Marcelo Damario (Presidente)
Borges, Lisandra Marques Gava
Forti, Fábio Luís
Título em português
Caracterização parcial do complexo SCF1 contendo a proteína FBXO25 fosforilada
Palavras-chave em português
Complexos SCF1
FBXO25
Protoarrays
SUP
Resumo em português
A FBXO25 é parte de uma E3 ligase do tipo RING, (Really Interesting New Gene), oligomérica do tipo SCF, responsável pelo reconhecimento específico do substrato a ser degradado via Sistema Ubiquitina-Proteassoma (SUP). O SUP é o principal mecanismo proteolítico intracelular, responsável pela degradação de 80-90% das proteínas citosólicas e nucleares. A FBXO25 é capaz de formar um complexo SCF1 ativo (formado pela interação das proteínas Skp1, Cul1, Roc1 e uma proteína do tipo F-box), capaz de ubiquitinar seus substratos. Essa proteína se acumula no núcleo celular formando uma nova estrutura subnuclear denominada FANDs (FBXO25 Associated Nuclear Domains) que estão envolvidos na ubiquitinação nuclear. Nesse trabalho, purificamos complexos SCF1 (WT ou sem o domínio de interação com Skp1 (F)), tratados ou não com PMA, pela técnica de imunoprecipitação. Identificamos por espectrometria de massas um sítio de fosforilação essencial para FBXO25, quando células transfectadas são tratadas com o mitógeno PMA. Buscamos também por substratos diferencialmente ubiquitinados por esses complexos, por meio de ensaios em ProtoArrays®, identificando substratos envolvidos na via de sinalização ERK1/2.
Título em inglês
Partial characterization of SCF1 complex containing the protein phosphorylated FBXO25
Palavras-chave em inglês
FBXO25
Protoarrays
SCF1 Complex
UPS
Resumo em inglês
The FBXO25 is an E3 ligase RING type (Really Interesting New Gene), SCF oligomeric type, responsible for the specific recognition of the substrate to be degraded via the ubiquitin-proteasome system (SUP). SUP is the main intracellular proteolytic mechanism responsible for 80-90% degradation of cytosolic and nuclear proteins. The FBXO25 is capable of forming a complex SCF1 (formed by the interaction of proteins Skp1, Cul1, Roc1 protein and a type F-box), resulting in an active SCF complex which is able to ubiquitinate their substrates. This protein accumulates in the nucleus forming a subnuclear structure called FANDs (FBXO25 Associated Nuclear Domains) that are involved in nuclear ubiquitination. In this work, we purify complex SCF1 (WT or F- box, which is not able to interact with Skp1), treated or not with PMA, by immunoprecipitation technique. We identified by mass spectrometry, an essential phosphorylation site for FBXO25, when it is phosphorylated under the action of the mitogenic reagent PMA. We also search for differentially ubiquitinated substrates for these complexes, by testing in ProtoArrays® identifying substrates involved in the signaling pathway ERK1 / 2.
 
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ANACARLAMEDEIROS.pdf (2.05 Mbytes)
Data de Publicação
2016-01-12
 
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