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Master's Dissertation
DOI
https://doi.org/10.11606/D.17.2018.tde-07022022-140423
Document
Author
Full name
Raquel Maria de Campos
Institute/School/College
Knowledge Area
Date of Defense
Published
Ribeirão Preto, 2018
Supervisor
Committee
Sebollela, Adriano Silva (President)
Oliveira, Eduardo Brandt de
Rocha, Maria Jose Alves da
Souza, Daniel Martins de
Title in Portuguese
Caracterização preliminar do isolamento de oligômeros do peptídeo β-amiloide utilizando o anticorpo de cadeia única NUsc1
Keywords in Portuguese
Cromatografia de gel-filtração
Doença de Alzheimer
NUsc1
Oligômeros solúveis
Peptídeo β-amiloide
Abstract in Portuguese
A Doença de Alzheimer (DA) é uma doença neurodegenerativa que afeta atualmente cerca de 47 milhões de pessoas no mundo inteiro. A patogênese da DA tem sido associada a agregados oligoméricos solúveis do peptídeo β-amiloide (AβOs). Por terem sido apontados como os responsáveis por comprometer a plasticidade sináptica e a memoria, os AβOs se tornaram os principais alvos de estudos na busca por tratamentos para a DA. A imunização passiva constitui uma das estratégias terapêuticas mais promissoras para a neutralização dos AβOs. Um anticorpo que tem demonstrado dados promissores quanto à sua especificidade contra subpopulações oligoméricas neurotóxicas é o anticorpo de cadeia única NUsc1. Nesse trabalho, nosso objetivo foi determinar as condições ótimas para a elucidação da massa molecular (estado oligomérico) da(s) espécie(s) oligoméricas do peptídeo β-amiloide alvo do anticorpo de cadeia única NUsc1. Para isso, avaliamos preparações de oligômeros sintéticos submetidos a gel-filtração, na ausência ou presença de NUsc1, através do monitoramento por fluorescência e análises por ELISA, dot blot e espectrometria de massas. Nossos dados mostram que fomos capazes de produzir o anticorpo NUsc1 ligado a fago (pbNUsc1) funcional. Entretanto, em AβOs fracionados por SEC, apenas espécies de baixo peso molecular foram detectados em ELISA usando pbNUsc1 como anticorpo de detecção. Acreditamos que a ausência ou pouca abundância de espécies oligoméricas de Aβ de alto peso molecular na preparação de oligômeros usada nesse trabalho tenha influenciado nesses resultados. A fim de aumentar nossa capacidade de detecção de espécies pouco abundantes, desenvolvemos um método preliminar para detecção de Aβ por espectrometria de massas, visando análises futura do complexo NUsc1/AβOs.
Title in English
Preliminary characterization of the isolation of β-amyloid peptide oligomers using the single chain antibody NUsc1
Keywords in English
β-amyloid peptide
Alzheimer's disease
Gel filtration chromatography
NUsc1
Soluble oligomers
Abstract in English
Alzheimer's Disease (AD) is a neurodegenerative disorder that currently affects about 47 million people worldwide. AD pathogenesis has been associated with soluble oligomeric aggregates of β-amyloid peptide (AβOs). Since they were pointed out as those responsible for disrupting synaptic plasticity and memory, AβOs became the main target in the search for novel AD treatments. Passive immunization is one of the most promising therapeutic strategies for neutralization of AβOs. NUsc1 is a single chain fragment antibody which has shown promising results regarding its specificity against neurotoxic β-amyloid oligomeric subpopulations. In this work, we aim to determine optimal conditions for the elucidation of the molecular mass (oligomeric state) of β-amyloid peptide oligomeric species (s) targeted by the single-chain antibody NUsc1. For this purpose, we evaluated preparations of synthetic oligomers submitted to gel filtration, in either the absence or presence of NUsc1, by ELISA, dot blot and mass spectrometry. Our data show that we were able to produce functional phage-bound NUsc1 (pbNUsc1) antibody. However, in SEC fractionated AβOs, only low molecular weight species were detected by ELISA using pbNUsc1 as the detection antibody. We believe the absence or low abundance of high molecular weight Aβ oligomeric species in the oligomer preparation used has led to these results. In order to increase our capability of detecting low abundance species, we have developed a preliminary method for Aβ detection by mass spectrometry, aiming at future analyzes of the NUsc1/AβO complex.
 
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Raquel.pdf (1.94 Mbytes)
Publishing Date
2022-02-15
 
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