A Doença de Alzheimer (DA) é uma doença neurodegenerativa que afeta atualmente cerca de 47 milhões de pessoas no mundo inteiro. A patogênese da DA tem sido associada a agregados oligoméricos solúveis do peptídeo β-amiloide (AβOs). Por terem sido apontados como os responsáveis por comprometer a plasticidade sináptica e a memoria, os AβOs se tornaram os principais alvos de estudos na busca por tratamentos para a DA. A imunização passiva constitui uma das estratégias terapêuticas mais promissoras para a neutralização dos AβOs. Um anticorpo que tem demonstrado dados promissores quanto à sua especificidade contra subpopulações oligoméricas neurotóxicas é o anticorpo de cadeia única NUsc1. Nesse trabalho, nosso objetivo foi determinar as condições ótimas para a elucidação da massa molecular (estado oligomérico) da(s) espécie(s) oligoméricas do peptídeo β-amiloide alvo do anticorpo de cadeia única NUsc1. Para isso, avaliamos preparações de oligômeros sintéticos submetidos a gel-filtração, na ausência ou presença de NUsc1, através do monitoramento por fluorescência e análises por ELISA, dot blot e espectrometria de massas. Nossos dados mostram que fomos capazes de produzir o anticorpo NUsc1 ligado a fago (pbNUsc1) funcional. Entretanto, em AβOs fracionados por SEC, apenas espécies de baixo peso molecular foram detectados em ELISA usando pbNUsc1 como anticorpo de detecção. Acreditamos que a ausência ou pouca abundância de espécies oligoméricas de Aβ de alto peso molecular na preparação de oligômeros usada nesse trabalho tenha influenciado nesses resultados. A fim de aumentar nossa capacidade de detecção de espécies pouco abundantes, desenvolvemos um método preliminar para detecção de Aβ por espectrometria de massas, visando análises futura do complexo NUsc1/AβOs.

Alzheimer's Disease (AD) is a neurodegenerative disorder that currently affects about 47 million people worldwide. AD pathogenesis has been associated with soluble oligomeric aggregates of β-amyloid peptide (AβOs). Since they were pointed out as those responsible for disrupting synaptic plasticity and memory, AβOs became the main target in the search for novel AD treatments. Passive immunization is one of the most promising therapeutic strategies for neutralization of AβOs. NUsc1 is a single chain fragment antibody which has shown promising results regarding its specificity against neurotoxic β-amyloid oligomeric subpopulations. In this work, we aim to determine optimal conditions for the elucidation of the molecular mass (oligomeric state) of β-amyloid peptide oligomeric species (s) targeted by the single-chain antibody NUsc1. For this purpose, we evaluated preparations of synthetic oligomers submitted to gel filtration, in either the absence or presence of NUsc1, by ELISA, dot blot and mass spectrometry. Our data show that we were able to produce functional phage-bound NUsc1 (pbNUsc1) antibody. However, in SEC fractionated AβOs, only low molecular weight species were detected by ELISA using pbNUsc1 as the detection antibody. We believe the absence or low abundance of high molecular weight Aβ oligomeric species in the oligomer preparation used has led to these results. In order to increase our capability of detecting low abundance species, we have developed a preliminary method for Aβ detection by mass spectrometry, aiming at future analyzes of the NUsc1/AβO complex.