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Dissertação de Mestrado
DOI
https://doi.org/10.11606/D.11.2021.tde-17062021-161241
Documento
Autor
Nome completo
Marina Rodrigues Mazine
E-mail
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
Piracicaba, 2021
Orientador
Banca examinadora
Vieira, Thais Maria Ferreira de Souza (Presidente)
Dias, Fernanda Furlan Gonçalves
Furlan, Érika Fabiane
Jesus, Rogério Souza de
Título em português
Potencial antimicrobiano do muco epidérmico de pacu (Piaractus mesopotamicus) e tambaqui (Colossoma macropomum), espécies nativas do Brasil
Palavras-chave em português
AMP
Antibacteriano
Espécies nativas
Peixe
SDS-PAGE
Resumo em português
Os peptídeos antimicrobianos (AMPs) são compostos de defesa encontrados em plantas ou animais, relacionados a mecanismos de ação diferentes dos agentes antimicrobianos tradicionalmente utilizados. Os AMPs vêm sendo amplamente estudados e ainda possuem uma gama de ações e mecanismos a serem descobertos, podendo ser, portanto, uma alternativa aos antimicrobianos já conhecidos. Além disso, podem ser alternativas aos antibióticos convencionais utilizados na agricultura e piscicultura. Os peixes estão em constante contato com diversos microrganismos no ambiente aquático e isso torna relevante o estudo dos seus mecanismos de resposta imune, sendo o muco epidérmico o primeiro mecanismo de defesa, já que está em contato com o ambiente externo. O objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial antimicrobiano do muco (e suas frações) de duas espécies de pescado nativas do Brasil, o pacu (Piaractus mesopotamicus) e o tambaqui (Colossoma macropomum), frente a quatro bactérias relevantes para saúde humana e produção de alimentos: Escherichia coli, Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus e Salmonella entérica. As coletas de amostras foram realizadas em dois momentos diferentes do ano para identificar a influência da sazonalidade na composição do muco. Foram realizadas etapas de purificação e fracionamento das amostras de muco por extração em fase sólida (SPE - Solid Phase Extraction) em diferentes concentrações de isopropanol (0%, 20%, 40%, 60% e 80%.) A concentração de proteínas das amostras purificadas de muco foi em média 5,65 ± 0,39 mg/mL na estação seca (tambaqui) e 1,99 ± 0,09 mg/mL na mesma estação (pacu). Na estação úmida o tambaqui apresentou teor de proteína de 3,03 mg/mL ± 0,11 e o pacu teve, em média 0,88 mg/mL ± 0,09. Os resultados das análises das frações isoladas por eletroforese SDS-PAGE indicaram que a concentração de proteínas de 0,10 mg/mL da amostra fracionada de muco de pacu, com massa molecular menor de 13 kDa, apresentou atividade inibitória diante das quatro bactérias. Da mesma forma, amostras com perfil similar (menos de 13 kDa) e concentração proteica de 0,40 mg/mL proveniente de muco de tambaqui apresentou atividade inibitória diante das quatro bactérias estudadas, indicando que há potencial para estudo da composição dos mucos visando futuras aplicações. Além disso, o muco demonstrou diferenças sazonais, ampliando a possibilidade de estudos relativos aos peptídeos provenientes dessas espécies de pescado brasileiras.
Título em inglês
Antimicrobial potential of epidermal mucus of Brazilian fish native species pacu (Piaractus mesopotamicus) and tambaqui (Colossoma macropomum)
Palavras-chave em inglês
AMP
Antibacterial
Fish
Native species
SDS-PAGE
Resumo em inglês
Antimicrobial peptides (AMPs) are defense compounds found in plants or animals, related to mechanisms of action that differ from the antimicrobial agents currently used. AMPs have been widely studied and there is still a range of actions and mechanisms to be further discovered, thus they can be an alternative to the antimicrobials already known. In addition, they can be alternatives to conventional antibiotics used in agriculture, livestock and fish farming. Fish are in constant contact with several microorganisms in the aquatic environment and this makes the study of their immune response mechanisms relevant, being the epidermal mucus the first layer of defense since it is in contact with the external environment. The objective of this work was to evaluate the antimicrobial potential of mucus (and its fractions) from two native Brazilian fish species, pacu (Piaractus mesopotamicus) and tambaqui (Colossoma macropomum), against four bacteria relevant to human health and food production: Escherichia coli, Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus and Salmonella entérica. Sample collections were performed at two different times of the year to identify the influence of seasonality on mucus composition. Purification and fractionation steps of the mucus samples were performed by solid-phase extraction (SPE) in different concentrations of isopropanol at 0%, 20%, 40%, 60% and 80%. The protein concentration of the purified mucus samples averaged 5.65 ± 0.39 mg/mL in the dry season (tambaqui) and 1.99 ± 0.09 mg/mL in the same season (pacu). In the wet season tambaqui had a protein content of 3.03 mg/mL ± 0.11 and pacu had an average of 0.88 mg/mL ± 0.09. The results of the analysis of the isolated fractions by SDS-PAGE electrophoresis indicated that the protein concentration of 0.10 mg/mL of the pacu mucus fraction sample, with a molecular mass lower than 13 kDa, showed inhibitory activity against the four bacteria. Similarly, samples with similar profile (less than 13 kDa) and protein concentration of 0.40 mg/mL from tambaqui mucus showed inhibitory activity against the four bacteria studied, indicating that there is potential for further studies regarding the composition of mucus for future applications. Furthermore, the mucus showed seasonal differences, expanding the possibilities of studies on mucus and peptides from these Brazilian fish species.
 
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Data de Publicação
2021-06-21
 
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