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Dissertação de Mestrado
DOI
https://doi.org/10.11606/D.10.2021.tde-07032022-104239
Documento
Autor
Nome completo
Caroline Yumi Kayano
E-mail
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
São Paulo, 2021
Orientador
Banca examinadora
Ambrósio, Aline Magalhães (Presidente)
Ferreira Junior, Rui Seabra
Schmitz, Gabriela Justamante Händel
Título em português
Produção de albumina canina liofilizada para fins terapêuticos
Palavras-chave em português
Cão
DSC
FDM
Fracionamento
Plasma
Resumo em português
A albumina é a principal proteína do sangue, exercendo diversas funções no organismo tais como: pressão oncótica, equilíbrio ácido-básico, anticoagulante, entre outras funções. A hipoalbuminemia é comumente encontrada em pacientes críticos e associada a um mau prognóstico tanto na medicina quanto na veterinária, o que torna necessário o uso de uma solução de reposição de albumina. A produção de uma solução de albumina humana já é feita há mais de 50 anos a partir de técnicas de fracionamento do plasma. Na medicina veterinária, as técnicas de fracionamento não são realizadas de rotina e há poucos trabalhos com a utilização dessas técnicas no plasma canino. Apesar de já existir uma albumina canina liofilizada produzida nos EUA, ela não está disponível no Brasil devido aos altos custos de importação. Atualmente, não há trabalhos relacionados aos parâmetros críticos de qualidade da liofilização desta albumina, sendo que há uma demanda no mercado veterinário para seu uso clínico. Sendo assim, este trabalho objetivou o estudo do fracionamento do plasma canino para a purificação da albumina e do seu processo de liofilização. Para o fracionamento do plasma, foram avaliadas três técnicas diferentes utilizando três agentes precipitantes seguidos de cromatografia, com avaliação de rendimento e pureza. Para o estudo de liofilização, foram analisadas três soluções tampão diferentes com 9 formulações cada. O estudo de liofilização englobou a definição das temperaturas críticas de liofilização, e a avaliação pós-liofilização imediata. As três técnicas de fracionamento foram eficazes para a purificação da albumina canina, com a técnica utilizando PEG 6000 combinada com filtração tangencial obtendo o maior rendimento. Na liofilização, a formulação com 5% (p/v) de glicina em tampão com arginina 50 mM foi a que obteve as maiores temperaturas críticas. Outros trabalhos para o aperfeiçoamento na técnica de fracionamento do plasma e sobre a estabilidade a longo prazo da albumina liofilizada são necessários, porém este estudo é um primeiro passo para suprir uma demanda do mercado veterinário de uma albumina canina para uso clínico.
Título em inglês
Canine freeze-dried albumin production for therapeutical purposes
Palavras-chave em inglês
Dog
DSC
FDM
Fractionation
Lyophilization
Plasma
Resumo em inglês
Albumin is the main protein of the blood, being responsible for oncotic pressure, acid- basic balance, anticoagulant function, among other functions. Hypoalbuminemia is commonly associated with critically ill patients leading to a poor outcome either in medicine and veterinary. Thus, a replacement solution is needed. Albumin solutions are already being made from human plasma using fractionation techniques for more than 50 years. In veterinary, plasma fractionation is not commonly used, having only a few studies assessing these techniques in canine plasma. Although in the USA, there is already freeze- dried canine albumin, which is not available in Brazil due to the excessive costs of import, there are no studies about the critical parameters for the freeze-drying process, thus there is a demand for canine albumin production for clinical use. Therefore, this study intended to assess the fractionation of canine plasma for albumin purification and its freeze-drying process. For the plasma fractionation, we used three different protocols, with three different precipitating agents followed by chromatography, with the evaluation of yield and purity. For the freeze-drying process, we evaluated three buffer solutions with 9 different formulations each. The freeze-drying critical temperatures were defined for each formulation and immediate post-lyophilization evaluation was performed. From the three fractionation techniques, PEG 6000 combined with tangential filtration had a better yield. For the freeze-drying process, arginine 50 mM buffer with 5% (w/v) glycine formulation presented higher critical temperatures. Further studies are necessary to improve the fractionation process for better yields and purity, and for long-term stability evaluation of the freeze-dried albumin. However, this study is a first approach to supply the demand for canine albumin for clinical use.
 
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Data de Publicação
2022-04-05
 
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