Master's Dissertation
DOI
https://doi.org/10.11606/D.10.2021.tde-04032022-115225
Document
Author
Full name
Margarida Hissae Fukuya
E-mail
Institute/School/College
Knowledge Area
Date of Defense
Published
São Paulo, 2021
Supervisor
Committee
Gregory, Lilian (President)
Aleman, Mario Augusto Reyes
Gaeta, Natália Carrillo
Title in Portuguese
Avaliação de multirresistência de Staphylococcus aureus isolados de amostras de leite provenientes de vacas em assentamentos da região do Pontal do Paranapanema-SP
Keywords in Portuguese
MecA
MecC
Amostras
Meticilina
Saúde pública
Abstract in Portuguese
O estudo teve como objetivo investigar a presença de genes de resistência à meticilina, mecA e mecC, em Staphylococcus aureus isolados de leite de vacas em assentamentos na região do Pontal do Paranapanema, estado de São Paulo. A pesquisa iniciada pelo projeto Fapesp 2017/12271, avaliou a cadeia do leite em assentamentos do pontal do Paranapanema, utilizando-se do leite colhido de 724 animais provenientes de 8 assentamentos e 181 propriedades da região, tendo isolado bactérias, e o presente estudo utilizou-se de 100 amostras isoladas positivas para Staphylococcus aureus. Esta bactéria é responsável por causar prejuízo na produção leiteira, como causador de mastite, assim como no impacto na saúde pública humana. Ela está presente em quase todo o ambiente natural, e é considerada parte da flora comum do ser humano. O mais preocupante é a resistência que esta bactéria vem desenvolvendo aos antibióticos ao longo dos tempos. Nos últimos anos as cepas de Staphylococcus aureus resistentes à meticilina, SARM ou em inglês MRSA (Methicillin-resistant Staphylococcus aureus), vêm desafiando a área da Saúde Pública. Os oito assentamentos visitados foram analisados previamente em relação a manejo, higiene na ordenha e características dos animais, e posteriormente as amostras de leite foram submetidos à investigação dos micro- organismos responsáveis pela mastite na região, bem como à avaliação da contagem de células somáticas. Após o crescimento de bactérias presentes no leite, em placas de ágar sangue, realização de técnica bacterioscópica de Gram, teste de sensibilidade antimicrobiana in vitro, e isolamento de Staphylococcus sp, estas amostras foram submetidas à técnica de MALDI-TOF MS, para isolamento de cepas de Staphylococcus aureus. Dentre as amostras isoladas de Staphylococcus aureus, 100 foram destinadas para a pesquisa da presença do gene de resistência à meticilina, mecA, e mecC, pela técnica de PCR (polymerase chain reaction), que amplifica um segmento de DNA de interesse, produzindo milhões de cópias. Não foram encontrados resultados positivos nas amostras testadas, fato epidemiologicamente relevante para a região do Pontal do Paranapanema, considerando-se o aumento gradativo da resistência dos microrganismos aos antimicrobianos usados na prática clínica. Os genes mecA ou mecC geralmente estão associados ao MRSA, e para que a resistência bacteriana e transmissão entre as espécies possam ser monitoradas, a caracterização genotípica é importante. Para tanto, este trabalho buscou entender a ocorrência de genes de multirresistência nos isolados com essas características, buscando obter a presença dos genes mecA e mecC em rebanhos da região, nas amostras obtidas na região do Pontal do Paranapanema, a fim de associar com o tipo de manejo adotado. O estudo da resistência de bactérias em produções leiteiras no Brasil ainda é escasso e merece um maior incentivo, considerando- se que os produtos de origem animal podem ser uma porta de entrada destes micro organismos no homem. Este estudo focou na categoria de pequenos produtores, os assentados, e a ausência de genes mecA ou mecC nas amostras isoladas, podem indicar uma alternativa para a produção leiteira de qualidade, influenciados pelos fatores tamanho do rebanho e o tipo de manejo.
Title in English
Multidrug resistance evaluation of Staphylococcus aureus isolated from milk samples from cows in settlements in the Pontal do Paranapanema-SP
Keywords in English
MecA
MecC
Methicillin
Public health care
Samples
Abstract in English
This study investigated the presence of methicillin-resistant genes, mecA and mecC, in Staphylococcus aureus isolated from milk samples from cows in settlements in the region of Pontal do Paranapanema, in the state of São Paulo. The initial research by the Fapesp 2017/12271 project evaluated the milk chain in settlements in Pontal do Paranapanema, using milk collected from 724 animals from 8 settlements and 181 properties from the region, and isolated bacteria. The present study used 100 isolated samples positive for Staphylococcus aureus. This bacteria is responsible for causing damage to milk production due to mastitis and impacts human public health. It is present in almost every natural environment and is part of the common flora in humans. This bacteria has developed resistance to antibiotics over time, which is concerning. In recent years, strains of Methicillin-resistant Staphylococcus aureus MRSA have challenged Public Health. The eight settlements visited were previously analyzed regarding handling, milking hygiene, and characteristics of the animals. Later, the milk samples were investigated and searched for microorganisms responsible for mastitis and evaluated for somatic cell counts. After the growth of bacteria present in milk on blood agar plates, bacterioscopic Gram technique, in vitro antimicrobial sensitivity test, and isolation of Staphylococcus sp, the MALDI-TOF MS technique was applied to these samples to isolate the strains of Staphylococcus aureus. Among the isolated samples of Staphylococcus aureus, 100 were used to search for the presence of the methicillin resistance gene, mecA, and mecC, using the PCR (polymerase chain reaction) technique, which amplifies a segment of DNA of interest, producing millions of copies. There were no positive results in the samples tested, which is an epidemiologically relevant fact for the reigion of Pontal do Paranapanema, considering the gradual increase in the resistance of microorganisms to antimicrobials used in clinical practice. Genotypic characterization is vital to monitor bacterial resistance and transmission between species because the mecA or mecC genes are usually associated with MRSA. Therefore, this study tried to understand the occurrence of multiresistant genes in the isolated samples, seeking to obtain the mecA and mecC genes in herds from the region to associate with the type of management adopted. Products of animal origin can be a gateway for these microorganisms into humans. The study of bacterial resistance in dairy production in Brazil is still scarce and deserves further research. This study focused on the category of small producers, the settlers. The absence of mecA or mecC genes in the isolated samples may suggest an alternative for quality milk production, influenced by the herd size and type of management.
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Publishing Date
2022-04-04