A toxoplasmose é uma zoonose de distribuição mundial. O Brasil apresenta um dos mais altos índices de soroprevalência de Toxoplasma gondii em humanos do mundo e uma das mais altas diversidades genéticas do agente. As galinhas de vida livre, por seu hábito alimentar, são utilizadas para estudos de caracterização genotípica de isolados de T. gondii a fim de entender a estrutura populacional do parasita e suas características biológicas em diferentes regiões do mundo. O objetivo do presente estudo foi determinar a frequência de ocorrência de anticorpos anti-T. gondii de galinhas caipiras na Região Sul do Brasil utilizando o Teste de Aglutinação Modificado (MAT, título ≥ 10), isolar o parasita por meio de bioensaio em camundongos, e caracterizar os isolados de T. gondii genotipicamente por meio de PCR-Polimorfismo de Comprimento de Fragmentos de DNA gerados por Enzimas de Restrição (PCR-RFLP, 11 marcadores) e análise de Microssatélites (MS, 15 marcadores). Amostras de soro de 607 galinhas caipiras de 61 municípios da Região Sul foram testadas. Anticorpos anti-T. gondii foram encontrados em 54,9% (333/607) das galinhas, sendo observada uma frequência de ocorrência de 51,4% (110/214), 52,1% (100/192) e 61,2% (123/201) nos estados do Paraná, Santa Catarina e Rio Grande do Sul, respectivamente. Foi realizado o bioensaio em camundongos com os tecidos das galinhas com títulos ≥ 20 no MAT (304 aves), sendo obtidos 160 isolados (69 do Paraná, 39 de Santa Catarina e 52 do Rio Grande do Sul). A genotipagem PCR-RFLP completa foi obtida de 158 isolados de T. gondii revelando 41 genótipos (20 no Paraná, 17 em Santa Catarina e 22 no Rio Grande do Sul). Os Tipos clonais clássicos I, II e III (nos estados de Santa Catarina e Rio Grande do Sul), e as linhagens de ampla distribuição no Brasil (Tipos BrI, BrII e BrIII) foram observados. Dos demais genótipos encontrados, 18 já foram descritos anteriormente em diferentes Regiões do Brasil e 17 foram genótipos inéditos. A genotipagem por MS foi possível em 158 isolados de T. gondii. Examinando os oito marcadores de tipagem, foram identificados 60 tipos genéticos, porém, observando o conjunto dos 15 marcadores, um total de 118 genótipos foi revelado e 40 representaram clones. No estado do Paraná, foram identificados 24 tipos e 53 genótipos (16 clones); em Santa Catarina foram observados 18 tipos, sendo 26 genótipos (13 clones), e, no Rio Grande do Sul, 30 tipos e 39 genótipos (11 clones). Foi identificada tipagem correspondente aos tipos clonais I variante, II e III, além dos tipos não-arquétipos África1, Caribe1, e América do Sul1,2, 3,4, e os demais isolados foram identificados também como não-arquétipos, considerando os oito marcadores de tipagem. O estudo corrobora a alta diversidade de T. gondii no Brasil.

Toxoplasmosis is a worldwide distributed zoonosis. Brazil has one of the highest seroprevalence rates of Toxoplasma gondii in humans in the world, and one of the highest genetic diversities of the agent. Free-range chickens, because they feed on the ground, have been used in studies of genotypic characterization of T. gondii isolates to understand the population structure of the parasite and its biological characteristics in different regions of the world. The present study aimed to determine the frequency of occurrence of anti-T. gondii antibodies from free-range chickens in the South region of Brazil using the Modified Agglutination Test (MAT, titer ≥ 10), to isolate the parasite by mouse bioassay, and genotypically characterize the T. gondii isolates by PCR-Restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP, 11 markers) and Microsatellite analysis (MS, 15 markers). Serum samples from 607 free-range chickens from 61 municipalities were evaluated. Antibodies anti-T. gondii were found in 54.9% (333/607) of the chickens, with a frequency of occurrence of 51.4% (110/214), 52.1% (100/192), and 61.2% (123/ 201) in the states of Paraná, Santa Catarina and Rio Grande do Sul, respectively. The bioassay in mice was performed with the tissues of chickens with titers ≥ 20 in the MAT (304 birds) and 160 isolates were obtained (69 from Paraná state, 39 from Santa Catarina state and 52 from Rio Grande do Sul state). Complete PCR-RFLP genotyping was obtained from 158 T. gondii isolates revealing 48 genotypes (20 from Paraná, 17 from Santa Catarina and 22 from Rio Grande do Sul states). The classic clonal Types I, II and III (from the Santa Catarina and Rio Grande do Sul states), and the lineages widely distributed in Brazil (Types BrI, BrII and BrIII) were observed. Of the other genotypes found, 19 were previously described in different regions of Brazil and 17 were new genotypes. Genotyping by MS was possible in 158 T. gondii isolates. Examining the eight typing markers, 60 genetic types were identified, however, searching the set of 15 markers, a total of 118 genotypes were revealed and 40 represented clones. In Paraná state, 24 types and 53 genotypes (16 clones) were identified; in Santa Catarina, 18 types were observed, corresponding to 26 genotypes (13 clones), and, in Rio Grande do Sul, 30 types and 39 genotypes (11 clones). Typing corresponding to clonal types I variant, II and III was identified, in addition to non-archetypal types: Africa 1, Caribbean1, and South America1,2,3,4, and the other isolates were also identified as non-archetypes, considering the eight typing markers. The study corroborates the high diversity of T. gondii in Brazil.