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Mémoire de Maîtrise
DOI
https://doi.org/10.11606/D.10.2022.tde-26012023-115507
Document
Auteur
Nom complet
Juliana Fernandes de Paula Castro
Adresse Mail
Unité de l'USP
Domain de Connaissance
Date de Soutenance
Editeur
São Paulo, 2022
Directeur
Jury
Ferreira Neto, José Soares (Président)
Anzai, Eleine Kuroki
Souza Filho, Antonio Francisco de
Titre en portugais
Padronização da PCR em Tempo Real (qPCR) para diagnóstico de tuberculose bovina a partir de amostras de lesões sugestivas colhidas em abatedouros
Mots-clés en portugais
Diagnóstico direto
qPCR
Tuberculose bovina
Resumé en portugais
Para dar agilidade ao processo de diagnóstico direto da tuberculose bovina em lesões de carcaças condenadas pela doença em abatedouros, principal mecanismo de revelação de focos em Sistema de Vigilância (SV), duas técnicas de qPCR para detecção do agente diretamente do homogeneizado das lesões foram padronizadas e comparadas ao isolamento e identificação do M. bovis, considerada o padrão ouro. Assim, 167 amostras de lesões de carcaças condenadas por tuberculose, colhidas pelos Serviços de Inspeção de abatedouros dos estados de Mato Grosso e Santa Catarina foram homogeneizadas e submetidas ao isolamento e identificação do M. bovis, à qPCR IS1081 e à qPCR RD4. Os resultados de ambas qPCR mostraram-se fortemente associados aos do isolamento e identificação do M. bovis (p<0,01), com índice de concordância de 0,58 (moderada). Quando comparadas entre si, ambas qPCR exibiram resultados fortemente associados (p<0,01), com índice de concordância de 0,89 (forte). A Sensibilidade e a Especificidade da qPCR IS1081 foram de = 0,80 [0,69; 0,88] e 0,79 [0,71; 0,86]. Para a qPCR RD4 esses mesmos valores foram de 0,74 [0,62; 0,83] e = 0,84 [0,76; 0,90]. As estimativas da Sensibilidade e a Especificidade da qPCR RD4, específica para M. bovis, adotando como padrão ouro os resultados em paralelo dos outros dois métodos, foram de 0,74 [0,64; 0,83] e 1,00 [0,96; 1,00]. Em conclusão, os resultados obtidos para as duas qPCR foram equivalentes e a qPCR RD4 tem potencial para substituir a bacteriologia clássica, com vantagens operacionais, nas ações de detecção de focos de bTb no âmbito do SV para a doença.
Titre en anglais
Standardization of Real Time PCR (qPCR) for the diagnosis of bovine tuberculosis from samples of suggestive lesions collected in slaughterhouses
Mots-clés en anglais
Bovine Tuberculosis
Direct diagnosis
qPCR
Resumé en anglais
To speed up the process of direct diagnosis of bovine tuberculosis in lesions of carcasses condemned for the disease in slaughterhouses, the main mechanism for revealing infected herds in the surveillance system (SV), two qPCR techniques for detecting the agent directly from the homogenate of lesions were standardized and compared to the isolation and identification of M. bovis, considered the gold standard. Thus, 167 samples of lesions from carcasses condemned for tuberculosis collected by the Inspection Services of slaughterhouses in the states of Mato Grosso and Santa Catarina were homogenized and submitted to the isolation and identification of M. bovis, qPCR IS1081 and qPCR RD4. The results of both qPCR were strongly associated with those of M. bovis isolation and identification (p<0.01), with an agreement index of 0.58 (moderate). When compared to each other, both qPCR showed strongly associated results (p<0.01), with a concordance index of 0.89 (strong). The Sensitivity and Specificity of the qPCR IS1081 were 0.80 [0.69; 0.88] and 0.79 [0.71; 0.86]. For the qPCR RD4 these same values were 0.74 [0.62; 0.83] and = 0.84 [0.76; 0.90]. The estimates of Sensitivity and Specificity of the M. bovis-specific qPCR RD4, adopting as gold standard the parallel results of the other two methods, were 0.74 [0.64; 0.83] and 1.00 [0.96; 1.00]. In conclusion, the results obtained for the two qPCR were equivalent and the qPCR RD4 has the potential to replace classical bacteriology, with operational advantages, in actions to detect bTb infected herds within the scope of the SV for the disease.
 
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Date de Publication
2023-02-02
 
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