CHAMMAS, S. M. Avaliação da atividade antitumoral da formulação lipossomal DODAC 2AEH2F e do composto SC1640 um flavonóide obtido do extrato de Baccharis dracunculifolia em células de melanoma. 2023. XXX f. Tese (Doutorado em Ciências) Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, São Paulo, 2023. O melanoma é uma doença causada pelo crescimento descontrolado de melanócitos, e a forma metastática está envolvida em um complexo sistema de sinalização celular, inferindo certa quimioresistência, tornando-o uma enfermidade de difícil cura e as terapias envolvidas para o tratamento, proporcionam baixa eficácia, além de causarem pesados efeitos colaterais. Investigações para encontrar alternativas aos tratamentos, sempre é de grande valia. O presente estudo avaliou os efeitos citotóxicos do extrato de Baccharis dracunculifolia, obtido pelo método supercrítico em câmara de CO2 diretamente do vegetal Alecrim-do-Campo, sem a utilização de solventes, designado neste trabalho como SC-1640 ou ArC, o extrato assim obtido, foi analisado por cromatografia gasosa acoplada a espectrofotometria de massas (CG-MS) com a finalidade de identificar as moléculas presentes. Através de ensaios in vitro, foram comparados os efeitos citotóxicos do flavonóide ArC, do composto monofosfoéster 2AEH2F, com os quimioterápicos dacarbazina e paclitaxel, em células de melanoma humano SKmel-28, de melanoma murino B16F10, e fibroblasto normal de origem humana FN1, e fibroblasto de origem murino L929. Foram avaliadas também formulações lipossomais com o carreador DODAC com ArC, em três concentraçãoes diferentes. Os ensaios de viabilidade celular demonstraram efeitos favoráveis aos compostos estudados entre o grupo controle e as células tumorais. Foram utilizados marcadores para verificação de possíveis vias apoptóticas, como Bax, Bad, uPA, BCL-2, Caspase 3, PCNA, TNF-DR4, Citocromo C, mTOR e p53. A análise in silico da interação medicamentosa foi realizada pela plataforma SynergyFinder 2.0. O flavonóide ArC gerou um valor de IC50% para as células de melanoma humano SKmel-28 de 1,2 mM ao passo que para os fibroblastos humanos FN1 sofreram alterações na concentração de 2,47 mM, subsequentemente, produzindo um efeito mais tóxico ao melanoma SKmel-28. Em linhagem de melanoma murino, as células tumorais B16F10, tiveram um valor de IC50% de 1 mM, valor menor que o apresentado pelas células controle fibroblastos L929 , também murino de 2,8 mM. Em ensaios na formulação lipossomal do ArC os resultados foram potencializados pelos lipossomas carreados com o composto, demonstrando diferenças entre o DODAC vazio e o carreado com os compostos. As análises morfológicas corroboraram com os outros ensaios realizados, demontrando alterações estruturais em organelas e nas membranas das células. Os compostos demonstraram ser favoráveis para a prospecção de novos tratamentos para melanoma, devido a sua citotoxicidade e por apresentarem potencial modulador do ciclo celular, potencial elétrico mitocondrial, consequentemente produzindo efeitos antiproliferativos, significativos em células tumorais de melanoma humano e murino em comparação aos fibroblastos.

CHAMMAS, S. M. Evaluation of the antitumor activity of the liposomal formulation DODAC 2AEH2F and the compound SC1640 a flavonoid obtained from the extract of Baccharis dracunculifolia in melanoma cells. . 2023. 278 f. Tese (Doutorado em Ciências) Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, São Paulo, 2023. Melanoma is a tumor caused by the uncontrolled growth of melanocytes, and the metastatic form is involved in a complex cell signaling system, inferring a certain chemoresistance, making it a difficult disease to cure and the therapies involved for the treatment, providing low efficacy, in addition to causing severe side effects. Investigations to find alternatives to treatments are always of great value. The present study evaluated the cytotoxic effects of the extract of Baccharis dracunculifolia, obtained by the supercritical method in a CO2 chamber directly from the plant Alecrim-do-Campo, without the use of solvents, designated in this work as SC-1640 or ArC, the extract thus obtained , was analyzed by gas chromatography coupled to mass spectrophotometry (GC-MS) in order to identify the molecules present. Through in vitro assays, the cytotoxic effects of the flavonoid ArC, the monophosphoester compound 2AEH2F, with the chemotherapeutic drugs dacarbazine and paclitaxel, were compared in cells of human melanoma SKmel-28, of murine melanoma B16F10, and normal fibroblast of human origin FN1, and fibroblast of murine origin L929. Liposomal formulations with the DODAC carrier with ArC, at three different concentrations, were also evaluated. Cell viability assays showed favorable effects of the compounds studied between the control group and tumor cells. Markers were used to verify possible apoptotic pathways, such as Bax, Bad, uPA, BCL-2, Caspase 3, PCNA, TNF-DR4, Cytochrome C, mTOR and p53. The in silico analysis of the drug interaction was performed using the SynergyFinder 2.0 platform. The flavonoid ArC generated an IC50 value for SKmel-28 human melanoma cells of 1.2 mM whereas for human FN1 fibroblasts, it underwent concentration changes of 2.47 mM, producing a more toxic effect on melanoma. SKmel-28. In a murine melanoma cell line, the B16F10 tumor cells had an IC50 value of 1 mM, a value lower than that presented by the L929 fibroblast control cells, also murine, of 2.8 mM. In tests on the liposomal formulation of ArC, the results were enhanced by liposomes loaded with the compound, demonstrating differences between the empty DODAC and the one loaded with the compounds. The morphological analyses corroborated the other assays, demonstrating structural alterations in organelles and cell membranes. The compounds proved to be favorable for the prospect of new treatments for melanoma due to their cytotoxicity and because they have the potential to modulate the cell cycle, the mitochondrial electrical potential and, consequently produce significant antiproliferative effects in human and murine melanoma tumor cells compared to fibroblasts.