O bagre sapo Pseudopimelodus mangurus é um peixe siluriforme distribuído na bacia do rio Prata, cuja população vem se esgotando na última década. Estratégias de conservação e manutenção da diversidade genética tornam-se então necessárias, como o criobanco e a produção de quimeras germinativas por meio do transplante de células germinativas primordiais (PGCs). O objetivo deste trabalho foi estabelecer um procedimento para rastreabilidade de PGCs de bagre sapo, utilizando as regiões 3′- UTR de mRNAs endógenos ddx4 e dnd1 a fim de sintetizar mRNA artificial (gfp-Pm- ddx4 3′UTR/ DsRed -Pm-ddx4 3′UTR) e então injetados em zigotos (1 célula) de P. mangurus. Além disso, o mesmo mRNA foi utilizado em espécies Characiformes (Astyanax altiparanae e Prochilodus lineatus) para verificar a aplicação em outras espécies. Os genes ddx4 e dnd1 foram escolhidos como marcadores, considerando sua expressão durante o desenvolvimento embrionário e em tecidos larvais e adultos de P. mangurus. Células GFP ou DsRed positivas (presumíveis PGCs) foram observadas pela primeira vez por fluorescência em P. mangurus na fase de segmentação com 28 somitos, na fase gástrula com 70% de epibolia em A. altiparanae e segmentação com 6 somitos em P. lineatus. A porcentagem de marcação em embriões de P. mangurus (n = 521) foi de 3%, em A. altiparanae (n = 512) foi de 29%, em P. lineatus (n = 253) foi de 16%. A visualização de PGCs em P. mangurus foi possível apenas quando mRNA contendo o repórter DsRed foi usado. A sobrevivência embrionária foi de 12,2 ± 1,8% (p = 0,0006) em P. mangurus. No experimento de expressão gênica semiquantitativa, verificou-se a expressão de ddx4 e dnd1 apenas no desenvolvimento embrionário e nas gônadas, desde a fase de zigoto até a blástula, diminuindo a intensidade das bandas na gástrula com 50% de epibolismo e clivagem, mas a expressão ainda foi observada na fase de eclosão. Em tecidos adultos, ddx4 foi expresso em testículo e ovário, enquanto dnd1 foi expresso apenas em ovário. Os resultados indicaram que a marcação de PGCs em outras espécies foi mais eficiente do que em P. mangurus, sugerindo que existem problemas intrínsecos para a visualização de PGCs nesta espécie, principalmente antes da eclosão. Os dados acima permitem, pela primeira vez na literatura, a rastreabilidade in vivo de PGCs no bagre sapo e espécies de Characiformes usando ddx4 3′UTR de uma espécie Neotropical. Os resultados obtidos neste estudo podem ser aplicados para produzir quimeras germinativas como uma ação conservacionista e estabelecimento de criobancos para P. mangurus.

The marbled catfish Pseudopimelodus mangurus is a Siluriform fish distributed in the Prata river basin in which population is being depleted in the last decade. Strategies for the conservation and maintenance of genetic diversity becomes then necessary, such as cryobanking and the production of germline chimeras through transplantation of primordial germ cells (PGCs). The objective of this work was to establish a procedure for traceability of PGCs from marbled catfish, using to the 3′-UTR regions of mRNAs of endogenous ddx4 and dnd1 in order to synthetize artificial mRNA (gfp- Pm-ddx4 3′UTR/ Dsred-Pm-ddx4 3′UTR) and then injected into zygotes (1 cell) of P. mangurus. In addition, the same mRNA was used in Characiform species (Astyanax altiparanae and Prochilodus lineatus) to verify the application in other species. The ddx4 and dnd1 genes were chosen as markers, considering their expression during embryonic development and in larval and adult P. mangurus tissues. GFP or DsRed positive cells (presumptive PGCs) were observed for the first time by fluorescence in P. mangurus at segmentation phase with 28 somites, in the gastrula phase with 70% epiboly in A. altiparanae and segmentation with 6 somites in P. lineatus. The percentage of marking in P. mangurus embryos (n = 521) was 3%, in A. altiparanae (n = 512) it was 29%, in P. lineatus (n = 253) it was 16 %. Visualization of PGCs in P. mangurus was fesible only when mRNA containing the DsRed reporter was used. The embryo survival was 12.2 ± 1.8% (p = 0,0006) in P. mangurus. In the semiquantitative gene expression experiment, the expression of ddx4 and dnd1 was verified only in the embryonic development and in the gonads, from the zygote to the blastula stages, decreasing the intensity of the bands in the gastrula with 50% of epibolism and cleavage, but expression was still observed in the hatching phase. In adult tissues, ddx4 was expressed in testis and ovary, while dnd1 was expressed only in ovary. The results indicated that the marking of PGCs in other species was more efficient than in P. mangurus, suggesting that there are intrinsic problems for the visualization of PGCs in this species, especially before hatching. The above data allow, for the first time in the literature, the in vivo traceability of PGCs in marbled catfish and Characiformes species using ddx4 3′UTR from a Neotropical species. The results obtained in this study could be applied to produce germline chimera as a conservationist action and establishment of cryobanks for P. mangurus.