A variável touro tem apresentado um efeito significativo nas taxas de blastocisto podendo variar entre 6,9 e 51,2%. A elucidação dos fatores responsáveis por essas diferenças de desempenho entre touros tem impulsionado diversas linhas de pesquisas dentro da produção in vitro de embriões (PIVE). O estresse oxidativo é descrito como um dos fatores que podem levar a estas baixas taxas no sistema in vitro, causado por uma elevada produção de espécies reativas de oxigênio (EROs). Neste estudo a hipótese testada foi de que o tratamento com desacopladores de membrana mitocondrial reduz a produção mitocondrial de EROs, porém mantém a viabilidade espermática. Os objetivos foram comparar diferentes desacopladores de membrana mitocondrial, em relação à dose e o efeito do tempo de exposição sobre os atributos espermáticos. Para tanto foram realizados tratamentos com diferentes desacopladores [Carbonil Cianeto M-Clorafenilhidrazona (CCCP), 2,4-Dinitrofenol (DNP) e Carbonil Cianeto 4-(Trifluorometoxi) Fenilhidrazona (FCCP)] no sêmen descongelado de bovinos. Os resultados demonstraram que o DNP, dentre os testados, é um desacoplador fraco. A citometria de fluxo evidenciou que o FCCP e CCCP apresentaram redução significativa (p=0,0019, p<0,001, respectivamente) de células espermáticas manifestando marcação negativa para o estresse oxidativo celular e membrana plasmática íntegra. Já a análise computadorizada (CASA) revelou acentuada queda de motilidade com a utilização dos desacopladores CCCP e FCCP, provavelmente pela supressão da produção de ATP através da ATP sintase. O estudo em questão, demonstrou que a motilidade é o atributo mais sensível para o espermatozoide quando submetido ao tratamento com os referidos desacopladores e sugere a suplementação com glicose para promover a estimulação da via glicolítica e assim manter a viabilidade e motilidade destas células. O sêmen quando tratado antes do gradiente de Percoll®, mantém a motilidade constante devido a alguma influência não diagnosticada, mesmo quando suplementada com glicose (5 µM).

The bull variable has had a significant effect on blastocyst rates, ranging from 6.9 to 51.2%. Elucidate the factors responsible for these differences in different bull′s performance has been driven several lines of research in in vitro embryo production (IVP). Oxidative stress is described as one of the factors that can lead to these low rates in the in vitro system, caused by a high production of reactive oxygen species (ROS). In this study, the hypothesis tested was that treatment with mitochondrial membrane uncouplers reduces mitochondrial production of ROS, but maintains sperm viability. The aims were compare different mitochondrial membrane uncouplers, in relation to the dose and the effect of time exposure on sperm attributes. Treatments with different uncouplers [Carbonyl Cyanide M- Chloraphenylhydrazone (CCCP), 2,4-Dinitrophenol (DNP) and Carbonyl Cyanide 4- (Trifluoromethoxy) Phenylhydrazone (FCCP)] were carried out in thawed bovine semen. The results showed that the DNP, among those tested, is a weak uncoupler. Flow cytometry demonstrated that FCCP and CCCP showed a significant reduction (p=0.0019, p<0.001, respectively) of the sperm cells negative labeled for cellular oxidative stress and intact plasma membrane. Computerized assisted analysis (CASA) revealed a decrease in motility with the use of the uncouplers CCCP and FCCP, probably due to the suppression of ATP production through ATP synthase. The study in question demonstrated that motility is the most sensitive attribute for sperm when subjected to a treatment with the aforementioned uncouplers and suggests that supplementation with glucose can promote the stimulation of the glycolytic pathway and thus maintain the viability and motility of these cells. Semen, when treated before Percoll® gradient, keeps a constant motility due to some undiagnosed influence, even when supplemented with glucose (5 µM).