A criopreservação espermática é o método mais eficiente para preservar sêmen a longo prazo em mamíferos. No entanto, o congelamento do sêmen de cachaços ainda é o maior desafio para a indústria suína devido à alta sensibilidade ao choque frio das células espermáticas desta espécie e à variação dos resultados pós-descongelamento entre indivíduos e ejaculados do mesmo reprodutor. Para resolver esse problema, investigamos se os microRNAs (miRNAs) presentes em células espermáticas e pequenas vesículas extracelulares (EVs) do plasma seminal de ejaculados de suínos podem predizer se ejaculados permanecerão com alta qualidade após passarem pelo processo de congelação-descongelação. Para tanto, foram coletados 27 ejaculados de alta qualidade de 27 machos (um de cada), obtidas amostras de miRNAs de espermatozoides e das EVs de plasma seminal in natura através de protocolos de centrifugação e, após o processo de criopreservação, determinamos dois grupos com diferentes congelabilidades considerando as análises de estrutura e funcionalidade dos espermatozoides após a descongelação (P <0,05): Alta congelabilidade (AC; n = 04) e baixa congelabilidade (BC; n = 04). Feito isso, finalmente investigamos o perfil de miRNAs de espermatozoides e EVs de plasma seminal em ambos os grupos com diferentes congelabilidades. Nossos principais resultados mostraram que três miRNAs foram diferentemente abundantes em ejaculados BC, sendo o ssc-miR-503 encontrado em níveis mais elevados em células espermáticas. O ssc-miR-130a e o ssc-miR-9 foram mais abundantes em EVs do plasma seminal (P<0,10). Por meio da análise de enriquecimento, foi possível verificar que esses miRNAs estão relacionados as modificações no desenvolvimento das células germinativas masculinas e na produção de energia utilizada pelos espermatozóides para manter sua viabilidade e funcionalidade. Portanto, por meio deste estudo, podemos demonstrar que o ssc-miR-503, ssc-miR-130a e ssc-miR-9 estão relacionados à baixa criotolerância espermática no sêmen de suínos. Deste modo, esses miRNAs podem ser usados como biomarcadores para predizer sua baixa capacidade de tolerar o processo de criopreservação.

Sperm cryopreservation is the most efficient method to preserve semen for the long term in mammals. However, freeze boar semen is still the biggest challenge for the swine industry due to the high cold shock sensitivity of boar sperm cells and the variance of post-thaw results among individuals and ejaculates from the same boar. To solve this problem, we investigate if microRNAs (miRNAs) present in sperm cells and small extracellular vesicles (E.V.s) from seminal plasma of raw boar ejaculates can predict high-quality ejaculates after underwent the freeze-thaw process. Therefore, we collected 27 high-quality ejaculates of 27 boars (one of each) obtained miRNAs samples of sperm cells and E.V.s from raw seminal plasma through centrifugation protocols. After the cryopreservation process, we determined two groups with different freezability considering the analysis post-thaw of structure and sperm functionality (P<0.05): High freezability (H.F.; n=04) and low freezability (L.F.; n=04). That done, we finally investigate the miRNAs profile of sperm cells and E.V.s from seminal plasma in both groups with different freezability. Our main results showed that three miRNAs were differently abundant in L.F. ejaculates, being the ssc-miR-503 found in higher levels in sperm cells. The ssc-miR-130a and ssc-miR-9 most abundant in E.V.s from seminal plasma (P <0.10). Through enrichment analysis, it was possible to verify that these miRNAs could be performing modifications in the development of male germ cells and in the production of energy to spermatozoa to maintain their viability and functionality. Therefore, through this study, we can demonstrate that ssc-miR-503, ssc-miR-130a, and ssc-miR-9 are related to low sperm cryotolerance in boars semen. So those miRNAs can be used as a biomarker to predict their low ability to tolerate the cryopreservation process.