• JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
 
  Bookmark and Share
 
 
Disertación de Maestría
DOI
https://doi.org/10.11606/D.10.2020.tde-15052020-123158
Documento
Autor
Nombre completo
Flavia dos Santos Almeida
Dirección Electrónica
Instituto/Escuela/Facultad
Área de Conocimiento
Fecha de Defensa
Publicación
São Paulo, 2020
Director
Tribunal
Celeghini, Eneiva Carla Carvalho (Presidente)
Alves, Maíra Bianchi Rodrigues
Siqueira, Adriano Felipe Perez
Título en portugués
Efeito da insulina na criopreservação do sêmen bovino sobre a produção in vitro de embriões
Palabras clave en portugués
Criopreservação
Espermatozoide
FIV
Touros
Resumen en portugués
A insulina é um hormônio anabólico capaz de atuar na proteção das células espermáticas para minimizar os insultos da criopreservação, também atua na produção de embriões in vitro (PIVE) trazendo benefícios no desenvolvimento embrionário devido ao seu efeito antiapoptótico e mitogênico. Desta forma, o presente trabalho visa avaliar os efeitos da adição de insulina ao meio de criopreservação de sêmen sobre o potencial da PIVE de embriões. Para isso, foram utilizados dois ejaculados de seis touros (n=12), sendo que cada ejaculado foi distribuído em dois tratamentos para a criopreservação: Grupo controle (CO): sêmen diluído em meio Triladyl® (n=12) e Grupo Insulina (IN): sêmen diluído em meio Triladyl suplementado com insulina (150 µUI/mL, n=12). Duas palhetas de sêmen de cada partida de cada tratamento foram descongeladas, homogeneizadas e submetidas à seleção em gradiente de Percoll®. Os espermatozoides obtidos após Percoll® foram avaliados quanto à motilidade, vigor, integridade das membranas plasmática e acrossomal, potencial mitocondrial e fragmentação de DNA e, após foram utilizados para a fecundação in vitro (FIV) dos ovócitos. Para a PIV foram feitas quatro repetições, sendo aspirados folículos de ovários provenientes de abatedouro comercial e selecionados os complexos cumulus-oócito que apresentavam camadas de células do cumullus compactas e oócito com citoplasma homogêneo. Os oócitos foram submetidos ao processo de maturação in vitro (MIV) (24h/38,5°C/5%CO2).Para a FIV, os oócitos maturados foram distribuídos em dois grupos, sendo que um grupo recebeu o sêmen CO (n=1587)oócitos e o outro o sêmen IN (n= 1580).oócitos e incubados (18h/38,5°C/5%CO2). Após a FIV os presumíveis zigotos foram transferidos para o cultivo in vitro seguindo a ordem dos tratamentos e incubados por 8 dias (38,5°C/5%CO2/5%O2/90%N2). A resposta da FIV foi determinada pela taxa de clivagem no terceiro dia do cultivo. No dia 8, avaliou-se o número de blastocisto e a taxa de desenvolvimento em relação aos clivados. Os dados foram submetidos à análise de variância pelo procedimento misto (PROC MIXED) do programa SAS versão 9.3. Em todas as análises estatísticas, o nível de significância considerado foi de P≥0,05. A taxa de clivagem (D3) não foi afetada pela adição de insulina ao diluidor de criopreservação do sêmen (64,21±2,04 x 63,62±1,69%), mas foi notada que a insulina causou redução nas taxas de blastocisto (CO: 24,06±2,69% x IN: 20,04±2,54%) e de desenvolvimento embrionário (CO: 35,81±3,23% x IN: 30,21±3,37%). Por outro lado, foram encontrados efeitos de touro para as taxas de clivagem (variando de 54,19±2,34 a 71,91±2,39%), de blastocisto (variando de 6,76±0,97 a 36,18±2,22%) e de desenvolvimento embrionário (variando de 12,32±1,53 a 50,12±2,04%), mas estas alterações não foram relacionadas com variações na qualidade espermática. Em conclusão, a insulina adicionada ao meio de criopreservação dos espermatozoides não apresentou efeito benéfico nas condições experimentais sobre as taxas de produção de embriões in vitro.
Título en inglés
Effect of insulin on bovine semen cryopreservation on in vitro embryo production
Palabras clave en inglés
Bulls
Cryopreservation
IVF
Sperm
Resumen en inglés
Insulin is an anabolic hormone capable of acting in the protection of sperm cells to minimize cryopreservation insults, also acts in the production of in vitro embryos (PIV) bringing benefits in embryonic development due to its effect antiapoptotic and mitogenic. Thus, the present study aims to evaluate the effects of insulin addition to the means of cryopreservation of semen on the potential of PIV of embryos. For this, two ejaculates of six bulls (n=12) were used, each ejaculate was distributed in two treatments for cryopreservation: Control group (CO): semen diluted in Triladyl medium (n = 12) and Insulin Group (IN): semen diluted in Triladyl medium supplemented with insulin (150 µIU/mL, n = 12).Two semen reeds from each match of each treatment were thawed, homogenized and submitted to percoll gradient selection®. Sperm obtained after Percoll® were evaluated for motility, vigor, (acridine orange), plasma membrane and acrosomal integrity, mitochondrial potential and DNA fragmentation, and after they were used for in vitro fertilization (IVF) of embryos. For PIV, four replications were performed, and ovaries follicles from commercial slaughterhouse were aspirated and the cumulative-oocyte complexes that presented layers of compact and oocyte cumullus cells with homogeneous cytoplasm were selected The oocytes were submitted to the maturation process in vitro (IVM) (22h/38.5°C/5%CO2) and IVF performed shortly after maturation. Matured oocytes were distributed into two groups, one group received semen CO (n=1587) and the other semen IN (n= 1580). After fertilization the oocytes were incubated (18h/38.5°C/5%CO2) and the presumed zygotes were transferred to in vitro cultivation following the order of treatments and incubated for 8 days (38.5°C/5%CO2/5%O2/90%N2). The IVF response was determined by the cleavage rate on the third day of cultivation. On day 8, the number of blastocyst and the development rate were evaluated in relation to presumed zygotes. The data were submitted to variance analysis by the mixed procedure (PROC MIXED) of the SAS version 9.3 program. In all statistical analyses, the significance level considered was P≥0.05. Cleavage rate was not affected by the addition of insulin to the cryopreservation dilution of semen (64.21±2.04 x 63.62±1.69%), but insulin was noted to have caused a reduction in blastocyst rates (CO: 24.06±2.69% x IN: 20.04±2.54%) and embryonic development (CO: 35.81±3.23% x IN: 30.21±3.37%). On the other hand, bull effects were found for cleavage rates (ranging from 54.19±2.34 to 71.91±2.39%), blastocyst (ranging from 6.76±0.97 to 36.18±2.22%) and embryonic development (ranging from 12.32±1.53 to 50.12±2.04%), but these changes were not related to variations in sperm quality. In conclusion, insulin added to sperm cryopreservation extender has no beneficial effect on embryo production rates in vitro.
 
ADVERTENCIA - La consulta de este documento queda condicionada a la aceptación de las siguientes condiciones de uso:
Este documento es únicamente para usos privados enmarcados en actividades de investigación y docencia. No se autoriza su reproducción con finalidades de lucro. Esta reserva de derechos afecta tanto los datos del documento como a sus contenidos. En la utilización o cita de partes del documento es obligado indicar el nombre de la persona autora.
Fecha de Publicación
2020-08-12
 
ADVERTENCIA: Aprenda que son los trabajos derivados haciendo clic aquí.
Todos los derechos de la tesis/disertación pertenecen a los autores
CeTI-SC/STI
Biblioteca Digital de Tesis y Disertaciones de la USP. Copyright © 2001-2021. Todos los derechos reservados.