O transplante de células germinativas é uma abordagem promissora para a conservação e reconstituição de espécies de peixes ameaçadas de extinção. Para realizar essa biotecnologia, são necessários procedimentos espécie-específicos aplicados às espécies nativas. Este estudo teve como objetivo estabelecer técnicas de isolamento, caracterização e criopreservação de oogônias-tronco de Matrinxã (Brycon amazonicus), seguido de transplante em larvas triploides e transplante de células germinativas primordiais de Brycon amazonicus em embriões triploides (3N) de (Astyanax altiparanea) e híbridos triploides (H3N) de (Astyanax altiparanea x Astyanax fasciatus). Para tal, as gônadas de B. amazonicus foram digeridas enzimaticamente e as células germinativas tronco foram separadas por gradiente descontinuo de densidade e purificadas. A caracterização das oogônias-tronco foram feitas por análises morfológicas e expressão gênica, e posteriormente foram criopreservadas. As oogônias-tronco recém purificadas e criopreservadas de Brycon amazonicus foram marcadas com PKH26 e transplantadas na região da cavidade intraperitoneal em larvas triploides com 22 dias após a eclosão. Os resultados demonstraram que as análises de expressão gênica e expressão relativa evidenciaram uma baixa expressão dos genes de interesse para essas células, principalmente quando analisamos as expressões de nanog e oct4. A utilização do crioprotetor propanodiol a 2 M em células provenientes do gradiente de percoll, foi o mais eficaz na criopreservação quanto a viabilidade celular, sendo obtido cerca de 90% de viabilidade após descongelamento. Dez dias após o transplante de oogônias-tronco, foi possível identificar a presença das células doadoras em ambos tratamentos (oogônias-tronco recém purificadas e criopreservadas), no entanto, nos dias seguintes não foi observado a presença destas células nas cristas genitais dos hospedeiros. O transplante de células germinativas primordiais (PGCs) foi realizado utilizando as células GFP (proteína verde fluorescente) positivas no estágio de segmentação de B. amazonicus, nos embriões receptores 3N e H3N na região marginal lateral da blastoderme. Após o transplante, as células doadoras foram visualizadas durante todo o desenvolvimento embrionário, inclusive na eclosão, no entanto, não apresentaram migração e colonização. Este é o primeiro relato sobre o transplante de células germinativas utilizando larvas e embriões como receptores em espécies neotropicais. No entanto, para o nosso estudo, outros parâmetros devem ser otimizados para geração de quimeras germinativas e assim, poderão ser futuramente empregados em outras espécies nativas que estão em perigo de extinção ou de importância na aquicultura.

Germ cell transplantation is a promising approach for the conservation and reconstitution of endangered fish species. To carry out this biotechnology, species- specific procedures applied to native species are necessary. This study aimed to establish techniques for the isolation, characterization and cryopreservation of Matrinxã (Brycon amazonicus) stem oogonia, followed by transplantation into triploid larvae and transplantation of primordial germ cells of Brycon amazonicus into triploid (3N) embryos of (Astyanax altiparanea) and triploid hybrids (H3N) of (Astyanax altiparanea x Astyanax fasciatus). For this purpose, the gonads of B. amazonicus were enzymatically digested and the stem germ cells were separated by a discontinuous density gradient and purified. The stem oogonia were characterized by morphological analysis and gene expression, and were subsequently cryopreserved. The newly purified and cryopreserved stem oogonia of Brycon amazonicus were labeled with PKH26 and transplanted into the intraperitoneal cavity region in triploid larvae 22 days after hatching. The results showed that the analysis of gene expression and relative expression showed a low expression of genes of interest for these cells, especially when analyzing the expressions of nanog and oct4. The use of 2M propanediol cryoprotectant in cells from the percoll gradient was the most effective in cryopreservation in terms of cell viability, being obtained about 90% viability after thawing. Ten days after stem oogonia transplantation, it was possible to identify the presence of donor cells in both treatments (newly purified and cryopreserved stem oogonia), however, on the following days, the presence of these cells in the host's genital ridges was not observed. Transplantation of primordial germ cells (PGCs) was performed using GFP (green fluorescent protein) positive cells in the segmentation stage of B. amazonicus, in 3N and H3N recipient embryos in the lateral marginal region of the blastoderm. After transplantation, donor cells were visualized throughout embryonic development, including hatching, however, they did not show migration and colonization. This is the first report on germ cell transplantation using larvae and embryos as recipients in neotropical species. However, for our study, other parameters must be optimized for the generation of germinative chimeras and thus, may be used in the future in other native species that are in danger of extinction or of importance in aquaculture.