A criopreservação espermática é considerada um processo - chave para o uso das biotecnologias reprodutivas em bovinos, como inseminação artificial e produções in vivo e in vitro de embriões. No entanto, tal técnica causa redução da qualidade espermática, sendo o estresse oxidativo um dos principais mecanismos envolvidos em injúrias espermáticas pós-descongelamento. Neste contexto, acredita-se que a mitocôndria possua um papel central no desequilíbrio oxidativo durante a criopreservação espermática, por ser a principal fonte liberadora de espécies reativas de oxigênio (EROS). Assim, uma possível alternativa para melhorar a qualidade espermática pós-criopreservação seria uma terapia específica tendo como alvo essa organela, visando reduzir a liberação excessiva de EROS neste processo. Uma molécula promissora seria o MitoTEMPO que é capaz de quelar metais de transição responsáveis pela reação de Fenton, prevenindo a geração do radical hidroxila. Além disso, esta molécula possui papel na matriz mitocondrial com ação mimética de superóxido dismutase, o que, no entanto, pode levar a um acúmulo de peróxido de hidrogênio. Desta forma uma associação com mecanismos voltados ao peróxido de hidrogênio seria necessária (e.g., GSH). Portanto, o objetivo do presente estudo foi avaliar se o tratamento com o protetor mitocondrial MitoTEMPO, associado ou não à GSH, é capaz de prevenir a produção excessiva de EROS por meio da proteção e manutenção da função mitocondrial, melhorando aspectos quantitativos e qualitativos espermatozoides criopreservados de bovinos. Para tanto, ejaculados de 17 touros (N=17) foram submetidos a criopreservação com diluidores suplementados com diferentes concentrações dos antioxidantes supracitados. Cada ejaculado foi dividido em 8 alíquotas, contendo concentrações crescentes da molécula MitoTEMPO (0, 25, 50 e 100 µM) com ou sem GSH (0 e 5 mM). Após a diluição de cada ejaculado nos meios contendo seus respectivos tratamentos antioxidantes, as amostras foram submetidas à criopreservação, descongelação e avaliação espermática. Observamos que as amostras, quando suplementadas em associação com GSH, apresentaram uma piora na de atividade mitocondrial (teste DAB), em algumas características da cinética espermática, como motilidade total, ALH e linearidade, e integridade de membranas plasmática e acrossomal. A suplementação somente com o MitoTEMPO não apresentou melhoras significativas na qualidade espermática após a descongelação. Os resultados do presente estudo indicam que a suplementação com MitoTEMPO e GSH nas doses utilizadas, associados ou não, não melhoram a qualidade espermática após a descongelação.

Sperm cryopreservation is considered a key process for logistics of other biotechniques in bulls, such as artificial insemination and in vivo, and in vitro embryo production. However, such a technique reduces sperm quality, oxidative stress being one of the main mechanisms involved in post-thaw sperm injuries. In this context, it is believed that mitochondria play a central role in oxidative imbalance during sperm cryopreservation, as it is the main source of reactive oxygen species (ROS). Thus, a possible alternative to improve post-cryopreservation sperm quality would be a specific therapy targeting this organelle, aiming to reduce the excessive release of ROSs in this process. A promising molecule would be MitoTEMPO, which is capable of chelating transition metals responsible for the Fenton reaction, preventing the generation of the hydroxyl radical. In addition, this molecule plays a role in the mitochondrial matrix with mimetic action of superoxide dismutase, which, however, can lead to an accumulation of hydrogen peroxide. Thus, an association with mechanisms aiming hydrogen peroxide would be necessary (e.g., GSH). Therefore, the objective of the present study was to assess whether treatment with the mitochondrial protector MitoTEMPO, associated or not with GSH, is able to prevent the excessive production of ROS through the protection and maintenance of mitochondrial function, improving quantitative and qualitative aspects of cryopreserved sperm in bull. Towards this aim, ejaculates of 17 bulls (N = 17) were subjected to cryopreservation with extenders supplemented with different concentrations of the aforementioned antioxidants. Each ejaculate was divided into 8 aliquots, containing increasing concentrations of MitoTEMPO (0, 25, 50 and 100 µM) with or without GSH (0 and 5 mM). After diluting each ejaculate in the media containing their respective antioxidant treatments, the samples were subjected to cryopreservation, thawing and sperm analysis. We observed that the samples, when supplemented in association with GSH, showed a deleterious effect on mitochondrial activity (DAB test), in some characteristics of sperm kinetics, such as total motility, ALH and linearity, and integrity of plasmatic and acrosomal membranes. Supplementation with MitoTEMPO alone did not show significant improvements in sperm quality after thawing. The results of the present study indicate that supplementation with MitoTEMPO and GSH at the doses used, associated or not, do not improve sperm quality after thawing.