Tesis Doctoral
DOI
https://doi.org/10.11606/T.10.2023.tde-11012024-125904
Documento
Autor
Nombre completo
Vitor Hugo Guilger Gonzaga
Dirección Electrónica
Instituto/Escuela/Facultad
Área de Conocimiento
Fecha de Defensa
Publicación
São Paulo, 2023
Director
Tribunal
Madureira, Ed Hoffmann (Presidente)
Celeghini, Eneiva Carla Carvalho
Oliveira, Bruna Marcele Martins de
Silva, Edson Roberto da
Silva, Janaina Della Torre da
Título en portugués
Correlação in vitro-in vivo (IV-IVC) de um novo dispositivo intravaginal de progesterona em matriz de silicone para vacas leiteiras
Palabras clave en portugués
Álcool
Concentração plasmática
Higuchi
Sds
Solubilidade
Resumen en portugués
Dispositivo intravaginal de progesterona (P4) é uma importante ferramenta da reprodução, para ter ganho produtivo em fazendas leiteiras. Desta forma, os objetivos deste trabalho foram: 1) obter o perfil de liberação da P4, in vitro, durante nove dias, de um novo dispositivo intravaginal (SM3,2g), para gado leiteiro, empregando-se dois meios de dissolução: solução de etanol:água (60:40) e solução de Dodecil Sulfato de Sódio (SDS) 0,5%; 2) quantificar, por radioimunoensaio (RIE), a P4 sérica, em vacas leiteiras lactantes, após a aplicação intravaginal do dispositivo SM-3,2 g, por um período de nove dias e; 3) estabelecer a correlação do perfil de liberação in vivo, com os perfis de liberação obtidos a partir dos dois experimentos in vitro. Para o experimento in vivo, em delineamento alternado, com medidas repetidas no tempo, vinte vacas multíparas e lactantes foram submetidas à protocolo de sincronização do ciclo estral pré inclusão, com a finalidade de induzir a formação de corpo lúteo. Ao término dessa etapa (D0) os animais foram distribuídos aleatoriamente em dois grupos experimentais: 1) Grupo controle (COM; n=10): vacas com implante auricular subcutâneo de progestágeno; e 2) Grupo tratado (SM; n=10): vacas com dispositivo intravaginal, com 3,2 g de progesterona. Imediatamente antes de receberem os tratamentos, foi colhida a primeira amostra de sangue (T0) e também nos tempos 2, 4, 8, 12, 24, 48, 72, 96, 120, 144, 168, 192 e 216h, em seguida a colocação dos implantes, também foram colhidas amostras de sangue. Posteriormente a última colheita de sangue (216h), os implantes foram retirados e mais quatro amostras de sangue foram colhidas nos tempos 228, 240, 252 e 264h, quando então, foi administrado GnRH para nova sincronização do ciclo estral pré inclusão. Por se tratar de delineamento alternado, houve a inversão dos grupos experimentais; assim, os animais que eram do grupo controle, no primeiro período (P1) do experimento, passaram, nesse segundo período (P2), para o grupo dos animais tratados e vice- versa. O protocolo de sincronização e as demais etapas seguiram a cronologia do período anterior (P1). Os testes de dissolução in vitro, foram conduzidos em triplicata e a quantificação de P4, realizada por espectrofotometria. Realizou-se teste de correlação (PROC CORR) entre os tratamentos (in vitro x in vitro e in vitro álcool x in vitro SDS). Para todas as comparações foi utilizado o nível de significância estatística de 5% (p≤0,05). Assim, a concentração plasmática de P4, nos animais tratados com SM-3,2, obtidas no teste in vivo, apresentou pico, após 12 horas de inserção do DIV (1,1±0,097 ng/mL), que se manteve por dois dias (1,1±0,063) e, só a partir de 72 horas (D3), é que começou a declinar (0,86±0,095 ng/mL), permanecendo constante (0,80±0,078 ng/mL) até o dia de retirada do implante. Além disso, os animais tratados com a fonte exógena de P4 e que produziam maior quantidade de leite (Classe - 1) apresentaram aumento na concentração plasmática do esteroide (0,61±0,04 ng/mL), porém, menor do que as vacas da Classe - 2 (0,73±0,04 ng/mL). No teste in vitro, ao final das 216h, o dispositivo de 3,2g, liberou 2815,66±39,44 mg de P4 no meio alcoólico e 2066±25,61 no Dodecil Sulfato de Sódio e ambos se ajustaram ao modelo matemático de Higuchi (Qt = Kht1/2), com coeficiente angular (slope) de 905,79 µg/cm2 /t1/2 e 543,38 µg/cm2 /t1/2, respectivamente. Por fim, obtiveram-se correlações positivas e fortes entre: a) os testes in vitro (r = 0,99281), b) entre o teste in vitro, realizado com meio alcoólico e o experimento in vivo (r = 0,78895) e c) no teste in vitro realizado com meio surfactante e o teste in vivo (r = 0,8158). Conclui-se que o novo implante intravaginal (SM-3,2) foi eficaz para inibir a ovulação dos folículos dominantes dos animais tratados. O coeficiente angular (slope) do SDS é um pouco menor do que o encontrado no meio ÁLC, devido ao fato da solubilidade da P4 ser maior em meio alcoólico do que em SDS 0,5%.
Título en inglés
In vitro-in vivo correlation (IV-IVC) of a new silicone matrix progesterone intravaginal device for dairy cows
Palabras clave en inglés
Alcohol
Higuchi
Plasmatic concentration
Sds
Solubility
Resumen en inglés
Intravaginal progesterone (P4) device is an important reproduction tool to have a productive gain in dairy farms. Thus, the aims of this work were: 1) to obtain the P4 release profile, in vitro, during nine days, from a new intravaginal device (SM3,2g), for dairy cattle, using two dissolution media: ethanol: water solution (60:40) and 0,5% Sodium Dodecyl Sulfate solution (SDS); 2) quantify, by radioimmunoassay (RIA), serum P4 in lactating dairy cows, after intravaginal application of the SM-3,2 g device, for a period of nine days and; 3) establish a correlation between the in vivo release profile with the release profiles obtained from the two in vitro experiments. For the in vivo experiment, in an alternate design, with repeated measurements over time, twenty multiparous and lactating cows were submitted to a pre-inclusion estrous cycle synchronization protocol, in order to induce the formation of an corpus luteum. At the end of this stage (D0) the animals were randomly distributed into two experimental groups: 1) Control Group (CON; n=10): cows with subcutaneous auricular implant of progestogen; and 2) Treated Group (SM; n=10): cows with intravaginal device, with 3,2 g of progesterone. Immediately before receiving the treatments, the first blood sample (T0) was collected and also at times 2, 4, 8, 12, 24, 48, 72, 96, 120, 144, 168, 192 and 216h, after placement implants, blood samples were also collected. After the last blood collection (216h), the implants were removed and four more blood samples were taken at times 228, 240, 252 and 264h, when GnRH was administered for new synchronization of the pre-inclusion estrous cycle. As this was an alternating design, the experimental groups were reversed; therefore, the animals that were in the control group, in the first period (P1) of the experiment, were transferred, in this second period (P2), to the group of treated animals and vice versa.The synchronization protocol and the other steps followed the chronology of the previous period (P1). In vitro dissolution tests were conducted in triplicate and P4 quantification was performed by spectrophotometry. A correlation test (PROC CORR) was performed between treatments (in vitrox in vitroand in vitro alcohol x in vitro SDS). For all comparisons, astatistical significance level of 5% (p≤0,05) was used. Hence, the plasmatic concentration of P4, in the animals treated with SM-3,2, obtained in the in vivo test, presented a peak, after 12 hours of IVD insertion (1,1±0,097 ng/mL), which was maintained for two days (1,1±0,063) and, only after 72 hours (D3), it began to decline (0,86±0,095 ng/mL), remaining constant (0,80±0,078 ng/mL) until the day of implant removal. In addition, animals treated with the exogenous source of P4 and that produced a greater amount of milk (Class - 1) showed an increase in the plasma concentration of the steroid (0,61±0,04 ng / mL), but less than the cows in Class - 2 (0,73±0,04 ng/mL). In the in vitro test, at the end of 216 hours, the 3,2g device had released 2815,66±39,44 mg of P4 into the alcohol medium and 2066±25,61 into the sodium dodecyl sulphate medium and both fitted Higuchi’s mathematical model (Qt = Kht1/2), with an angular coefficient (slope) of 905,79 µg/cm2/t1/2 and 543,38 µg/cm2/t1/2, respectively. Finally, positive and strong correlations were obtained between a) in vitro tests (r = 0,99281), b) between the in vitro test, performed with alcoholic medium and the in vivoexperiment (r = 0,78895) and c) the in vitro test performed with surfactant medium and the in vivotest (r = 0,8158). It is concluded that the new intravaginal implant (SM-3,2) was effective in inhibiting the ovulation of the dominant follicles of the treated animals. The angular coefficient (slope) of SDS is a little lower than that found in ALC medium, since P4 solubility is higher in alcoholic medium than in SDS 0,5%.
ADVERTENCIA - La consulta de este documento queda condicionada a la aceptación de las siguientes condiciones de uso:
Este documento es únicamente para usos privados enmarcados en actividades de investigación y docencia. No se autoriza su reproducción con finalidades de lucro. Esta reserva de derechos afecta tanto los datos del documento como a sus contenidos. En la utilización o cita de partes del documento es obligado indicar el nombre de la persona autora.
Fecha de Publicación
2024-04-04