O objetivo do estudo foi avaliar os efeitos da adição de insulina e IGF-I no diluidor para criopreservação de sêmen bovino sobre as características espermáticas e fertilidade. Foram realizados dois estudos. No estudo 1, foi avaliada a adição de diferentes concentrações de insulina e IGF-I em diluidores comerciais (Botubov® e Triladyl®). Foram realizados dois experimentos, cada um foram utilizados três ejaculados de quatros touros (n=12). Cada ejaculado foi dividido em sete frações para a diluição nos seguintes tratamentos: CON: somente diluidor; IGF100: diluidor adicionado de IGF-I 100 ng/mL; IGF200: IGF-I 200 ng/mL; INS150: Insulina 150 µUI/mL; INS200: Insulina 200 µUI/mL; ASS1: IGF-I 100 ng/mL + Insulina 150 µUI/mL; ASS2: IGF-I 200 ng/mL + Insulina 200 µUI/mL. No experimento 1 o diluidor base foi o Botubov®, enquanto no experimento 2 foi o Triladyl®. O sêmen foi criopreservado por sistema automatizado. Em ambos os experimentos o sêmen foi avaliado pós-criopreservação quanto à motilidade espermática, integridade das membranas plasmática (H342 e PI) e acrossomal (FITC-PSA) e potencial de membrana mitocondrial (JC-1). As concentrações de 150 µUI/mL de insulina e de 100 ng/mL de IGF-I apresentaram os melhores resultados, sendo que INS150 preservou melhor as características espermáticas do que os grupos controle e IGF. No estudo 2, foi avaliado o impacto da suplementação de insulina e IGF-I em sêmen de touros de alta e baixa congelabilidade sobre a qualidade espermática e taxa de prenhez. Foram realizados dois experimentos. No experimento 1, foram utilizados quatro ejaculados de 10 touros de alta (n=40) e de 10 touros de baixa (n=40) congelabilidade, que foram divididos em três frações, sendo acrescentados os tratamentos: Controle: somente diluidor Triladyl®; IGF: diluidor + IGF-I (100 ng/mL) e INS: diluidor + Insulina (150 µUI/mL). Pós-criopreservação, o sêmen foi avaliado quanto a motilidade (CASA), integridade de membrana plasmática (Live:Dead sperm Viability kit), integridade do acrossomo (FITC-PSA), peroxidação lipídica (BODIPY) e estabilidade das membranas (Merocianina 540). Notou-se que a insulina preservou melhor motilidade subjetiva, total, progressiva, velocidade de trajeto, integridade das membranas plasmática e acrossomal, reduziu peroxidação lipídica e desordem das membranas, principalmente no sêmen de touros de baixa congelabilidade. No experimento 2, foi verificado o efeito da adição de insulina ao diluidor de criopreservação sobre a taxa de prenhez. Dois ejaculados de três touros de alta (n=6) e de três touros de baixa (n=6) congelabilidade foram utilizados. Cada ejaculado foi dividido em duas frações: Controle: somente diluidor Triladyl® e INS: diluidor Triladyl® adicionado de Insulina (150 µUI/mL). Foram submetidas à inseminação artificial em tempo fixo (IATF) 1022 vacas, destas 509 receberam sêmen de alta congelabilidade, sendo 252 controles e 257 com insulina, e 513 receberam sêmen de baixa congelabilidade, sendo 261 controle e 252 com insulina. A taxa de prenhez não foi influenciada pela adição da insulina e nem pela congelabilidade do sêmen. Dessa forma, pode-se concluir que a insulina na concentração de 150 µUI/mL preserva a cinética espermática e integridade das membranas, diminui a peroxidação lipídica e aumenta a estabilidade das membranas; contudo não influencia na taxa de prenhez por IATF.

The aim of the study was to evaluate the effects of the addition of insulin and IGF- I to the semen extender for cryopreservation on bovine sperm characteristics and fertility. Two studies were carried out. In study 1, the addition of different concentrations of insulin and IGF-I in commercial extenders (Botubov® and Triladyl®) was evaluated. Two experiments were conducted, three ejaculates from four bulls were used (n = 12) in both experiments. Each ejaculate was divided into seven fractions for dilution in the following treatments: CON: only extender; IGF100: extender added IGF-I 100 ng/mL; IGF200: IGF-I 200 ng/mL; Ins150: Insulin 150 µUI/mL; Ins200: Insulin 200 µUI/mL; Ass1: IGF-I 100 ng/mL + Insulin 150 µUI/mL; Ass2: IGF-I 200 ng/mL + Insulin 200 µUI/mL. In experiment 1, the base extender was Botubov®, while in experiment 2, it was Triladyl®. The semen was frozen by an automated system. In both experiments, semen was evaluated post-cryopreservation for sperm motility, integrity of plasma (H342 and PI) and acrosomal (FITC-PSA) and mitochondrial membrane potential (JC-1). The concentrations of 150 µUI/mL insulin and 100 ng/mL IGF-I showed the best results, being the INS150 preserved better sperm characteristics than the control or IGF groups. In study 2, was evaluated the impact of insulin and IGF-I supplementation on semen of bulls with high and low freezability on sperm quality and pregnancy rates. Two studies were accomplishes. In experiment 1, were used four ejaculates of 10 bulls of high freezability (n = 40) and 10 bulls of low (n = 40), which they were divided into three fractions, and added treatments: Control: only Triladyl® extender; IGF: Triladyl® extender added IGF-I (100 ng/mL) and INS: Triladyl® extender added Insulin (150 µUI/mL). Post-cryopreservation, semen was evaluated for motility (CASA), plasma membrane integrity (Live: Dead sperm Viability kit), acrosome integrity (FITC-PSA), lipid peroxidation (BODIPY) and membrane stability (Merocyanine 540). It was noted that insulin showed greater conservation of subjective, total, progressive motility, average path velocity, plasma and acrosomal membrane integrity, lower lipid peroxidation index and less membrane disorder, especially in semen of bulls with low freezability. In experiment 2, the effect of adding insulin to the cryopreservation extender was verified on the pregnancy rate. Two ejaculates from three bulls of high freezability (n = 6) and three bulls of low (n = 6) were used. Each ejaculate was divided into two fractions and added treatments: Control: only Triladyl® extender and INS: Triladyl® extender added Insulin (150 µUI/mL). Cows were subjected to fixed-time artificial insemination (FTAI), 509 received semen with high freezability, being 252 controls and 257 with insulin, and 513 received semen with low freezability, being 261control and 252 with insulin. The pregnancy rate was not influenced by the addition of insulin and was not different for cows receiving high or low semen freezability. Thus, it can be concluded that insulin at a concentration of 150 µUI/mL preserves sperm kinetics and membrane integrity, decreases lipid peroxidation and increases membrane stability; however, it does not influence the pregnancy rate by FTAI.