O processo de criopreservação de espermatozoides é uma biotecnologia de grande importância na pecuária brasileira. Porém, essa técnica causa uma diminuição considerável da qualidade espermática, ocorrendo perda de motilidade e aumento de danos nos espermatozoides. Uma das causas desta perda de qualidade é por conta do aumento na quantidade de Espécies Reativas de Oxigênio (EROs), levando a um desbalanço oxidativo espermático, denominado estresse oxidativo. O espermatozoide possui citoplasma reduzido e, consequentemente menor quantidades de moléculas antioxidantes, dificultando sua defesa contra as EROs. Além disso, ele carece de mecanismos de reparação celular e uma maior quantidade de ácidos-graxo insaturados em sua membrana, o que predispõe ainda mais essas células aos ataques das EROs. Terapias antioxidantes são uma alternativa para a diminuição do estresse oxidativo durante o processo de criopreservação, porém as EROs também possuem papel fisiológico na maturação dessas células. Portanto uma terapia antioxidante antes do congelamento dessas células apresenta um desafio, já que é necessário encontrar as concentrações ideais de cada molécula antioxidante. Acredita-se que a mitocôndria seja a principal fonte energética do espermatozoide, que possui essas organelas em grande quantidade em sua peça intermediária, sendo essenciais para sua motilidade. Essa produção de energia também leva a produção das EROs. Uma alternativa à terapia antioxidante seria um moderado desacoplamento mitocondrial, diminuindo a produção dessas EROs. Porém, isso também pode causar déficit energético espermático. Pensando nisso, a adição de glicose no meio de criopreservação parece interessante, uma vez que estudos demonstraram que o espermatozoide também obtém energia através da via glicolítica. O objetivo deste estudo foi realizar um moderado desacoplamento mitocondrial espermático com o uso da molécula 2,4-dinitrophenol (DNP) em diferentes concentrações, associando ou não este tratamento com glicose e analisar seus efeitos na funcionalidade, bioenergética e homeostase oxidativa dos espermatozoides ovinos submetidos à criopreservação. Foi observada maior porcentagem de espermatozoides com baixa atividade e sem atividade mitocondrial em amostras tratadas com 10 µM de DNP em relação ao controle (0 µM DNP) na ausência da glicose. Não foram observadas diferenças significativas nos demais atributos espermáticos entre os tratamentos.

The cryopreservation of spermatozoa is a biotechnology of great importance in Brazilian livestock. However, this technique worsen sperm quality, with loss of motility and increased damage to sperm cells. One of the main sources of damage is due to increased amounts of Reactive Oxygen Species (ROS) produced in the freezing process, leading to oxidative imbalance in sperm called oxidative stress. Spermatozoa have reduced cytoplasm and, consequently, lower amounts of antioxidant molecules, making it difficult for these cells to inactivate the ROS. In addition, it lacks cellular repair mechanisms and have greater amount of unsaturated fatty acids in its membrane, which further predisposes these cells to ROS attack. Antioxidant therapies is one strategy to reduce oxidative stress during the cryopreservation process, but ROS also have a physiological role on the maturation of these cells. Therefore, an antioxidant therapy before freezing sperm proves to be complicated, since it is necessary to find the ideal concentrations of each antioxidant molecule. The mitochondria seems to be the main energy source of the spermatozoa, which have these organelles in large quantities in its midpiece portion, and they are essential for its motility. The ATP production can also rise ROS levels. An alternative to the antioxidant therapy would be a moderate mitochondrial uncoupling, regulating the production of the ROS. However, this can also cause sperm energy deficit. With that in mind, the addition of glucose in the cryopreservation medium seems interesting, since studies have shown that sperm can also obtain energy through the glycolytic pathway. The objective of this study was to perform a moderate sperm mitochondrial uncoupling using the molecule 2,4-dinitrophenol (DNP) in different concentrations, associated or not with glucose and to analyze its effects on functionality, bioenergetics and oxidative homeostasis of frozen ram sperm. Higher percentage of spermatozoa with low mitochondrial activity and no mitochondrial activity were observed in samples treated with 10 µM DNP in comparison with the control group (0 µM DNP), in absence of glucose. No significant differences were observed in other sperm attributes between the groups.