O objetivo desse estudo foi desenvolver estratégias para otimizar o uso do sêmen sexado refrigerado (SSR) mantido entre 15 ºC e 20 ºC por até 48 horas nos programas IATF. Assim, estudos foram realizados para: determinar a P/IA com SSR 48 ou 54 horas após a retirada do dispositivo intravaginal de P4 (DP4; Experimento 1); inseminar com SSR por até 48 horas após a liberação do sêmen no laboratório (TLab; Experimento 2); avaliar o impacto do processo de sexagem nos padrões seminais analisados pelo CASA durante 84 horas (Experimento 2a); estudar o efeito da redução da quantidade de espermatozoides na palheta contendo SSR na P/IA (Experimento 3) e a P/IA com a menor concentração de SSR na palheta com inseminação realizada 48 horas após TLab e 48 horas após a DP4 (Experimento 4). No Experimento 1, não houve interação tratamento^*momento da IATF para P/IA (P=0,27). Também, não houve efeito do tratamento (P=0,09) na P/IA [Controle = 61,6% (167/271) vs SSR 4M = 54,4% (161/296)]. Ainda, não se verificou efeito do momento da inseminação (P=0,11) na P/IA realizada 48h (54,8%; 155/283) ou 54h (60,9%; 173/284) após a retirada do DP4. No Experimento 2, não houve interação (P=0,66) tratamento^*momento da IA após TLab (24 ou 48 horas) na P/IA. Não houve diferença (P=0,13) na P/IA entre os grupos Controle (63,1%; 125/198), Convencional Refrigerado 6M (53,2%; 91/171) e SSR 4M (52,8%; 103/195). Ainda, não houve diferença (P=0,84) na P/IA quando a IATF foi realizada 24 (54,1%;167/309) ou 48 (59,6%; 152/255) horas após a TLab. No Experimento 2a, não houve interação tempo^*tratamento para nenhuma das variáveis analisadas. Verificou-se menor velocidade linear progressiva (VSL), batimento flagelar cruzado (BCF), Linearidade (LIN), Retilinearidade (STR) e espermatozoides com movimento progressivo no SSR em relação ao sêmen convencional refrigerado. Contudo, o SSR apresentou maior percentual de células com membrana íntegra (eosina/nigrosina; 82,9% vs. 75,3%; P=0,001). Verificou-se redução de espermatozoides móveis e rápidos a partir das 72 horas e BCF a partir das 84 horas. As demais variáveis analisadas não apresentaram diferença no tempo. No Experimento 3, não houve efeito (P=0,29) na P/IA entre as diferentes quantidades de espermatozoides na palheta de SSR. A P/IA do grupo 2M foi 47,2% (84/178), grupo 3M foi 47,9% (82/171), grupo 4M foi 56,1% (96/171) e Controle 52,2% (83/159). No Experimento 4, não houve interação tratamento^*TLab para P/IA (P=0,18). Entretanto, houve diferença entre os tratamentos (P=0,01). O grupo Controle apresentou P/IA de 62,5% (65/104)^a , o grupo SSR 2M 50,4% (67/133) ^ab e o grupo SSR 4M 43,2% (51/118) ^b . Não houve diferença na P/IA entre os diferentes TLab (P=0,37), sendo 53,8% (64/119) para 24h e 50,4% para 48h (119/236). Conclui-se que o processo de sexagem não comprometeu a P/IA em relação ao sêmen convencional, quando a inseminação foi realizada com SSR. Além disso, foi possível inseminar com SSR 48 horas após a retirada do DP4 sem reduzir a P/IA. Também, foi possível reduzir a quantidade de espermatozoides na palheta para 2 milhões e realizar a inseminação com SSR até 48 horas após TLab sem comprometer a P/IA.

The aim of this study was to develop strategies to optimize the use of liquid sexed semen (LSS) in TAI, kept between 15ºC and 20ºC for up to 48 hours. To this end, four studies were carried out to determine the P/AI with LSS, 48 or 54 hours after P4 withdrawal (Experiment 1), to inseminate with LSS for up to 48 hours after the release of semen in the laboratory (TLab; Experiment 2), to evaluate the impact of the sexing process on the seminal patterns evaluated by CASA during 84 hours (Experiments 2a), the effect of reducing the amount of sperm in the LSS straw on the P/AI (Experiment 3) and the P/AI of LSS with lower concentration in the straw with insemination performed 48 hours after TLab and 48 hours after removal of P4 (Experiment 4). In Experiment 1, there was no interaction between treatment^* time of TAI for P/AI (P=0.27). Also, there was no treatment effect (P=0.09) on P/AI [Control = 61.6% (167/271) vs 4M LSS = 54.4% (161/296)]. Also, there was no effect of the time of insemination (P=0.11) on the P/AI performed 48h (54.8%; 155/283) or 54h (60.9%; 173/284) after P4 device removal. In Experiment 2, there was no interaction (P=0.66) between treatment^*time of AI after TLab (24 or 48 hours) on P/AI. There was no difference (P=0.13) in the P/AI between the Control (63.1%; 125/198), Liquid Conventional 6M (53.2%; 91/171) and LSS 4M (52.8% ;103/195). Still, there was no difference (P=0.84) in P/AI when TAI was performed 24 (54.1%;167/309) or 48 (59.6%; 152/255) hours after semen output from the lab. In Experiment 2a, there was no time^*treatment interaction for any of the analyzed variables. There was lower VSL, BCF, LIN, STR and spermatozoa with progressive movement in the LSS compared to conventional liquid semen. However, the LSS showed a higher percentage of cells with an intact membrane (eosin/nigrosin; 82.9% vs. 75.3%; P=0.001). There was a reduction in mobile and fast spermatozoa after 72 hours and BCF after 84 hours. The other analyzed variables showed no difference thru the time. In Experiment 3, there was no difference (P=0.29) for P/AI between the different amounts of sperm in the LSS straw. The P/AI of the 2M group was 47.2% (84/178), 3M group was 47.9% (82/171), 4M group was 56.1% (96/171) and Control 52.2% (83 /159). In Experiment 4, there was no treatment^*TLab interaction for P/AI (P=0.18). However, there was difference between treatments (P=0.01). The Control group had a P/AI of 62.5% (65/104) ^a , the 2M LSS group 50.4% (67/133) ^ab and the 4M LSS group 43.2% (51/118) ^b . There was no difference in P/AI between the different TLabs (P=0.37), being 53.8% (64/119) for 24h and 50.4% for 48h (119/236). It is concluded that the sexing process did not compromise the P/AI in relation to conventional semen, when the insemination was performed with LSS. Furthermore, it was possible to inseminate with LSS 48 hours after P4 withdrawal without reducing P/AI. Also, it was possible to reduce the number of spermatozoa in the straw to 2 million and perform insemination with LSS up to 48 hours after TLab without compromising P/AI.