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Dissertação de Mestrado
DOI
10.11606/D.9.2007.tde-14122007-111238
Documento
Autor
Nome completo
Míriam Cristina Sakuragui Matuo
E-mail
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
São Paulo, 2007
Orientador
Banca examinadora
Pinto, Terezinha de Jesus Andreoli (Presidente)
Pessoa Júnior, Adalberto
Salgado, Hérida Regina Nunes
Título em português
Indução da produção de citocromo P-450 em Saccharomyces cerevisiae
Palavras-chave em português
Citocromo P-450
Condições de cultivo
Saccharomyces cerevisiae
Resumo em português
Saccharomyces cerevisiae tem sido empregada como modelo experimental em testes de mutagenicidade, devido à presença de um sistema citocromo P-450 capaz de metabolizar substâncias promutagênicas a sua forma ativa. O grande número de linhagens e as diferenças na capacidade de produção de citocromo P-450 dificultam a definição das condições ideais de cultivo para obtenção de células com alto conteúdo desta enzima, sendo que poucos são os trabalhos publicados a este respeito. O objetivo deste trabalho é avaliar as melhores condições de cultivo para produção de citocromo P-450 em S. cerevisiae. Para tanto, quatro diferentes linhagens foram cultivadas sob diferentes condições, a fim de avaliar a influência de fatores como fonte de carbono, tempo de incubação e adição de etanol ao meio de cultura. Foi verificado que células cultivadas na presença de fontes de carbono altamente fermentáveis e coletadas no final da fase de crescimento exponencial apresentavam o maior conteúdo da enzima. Observou-se também que o nível de citocromo P-450 variou entre as linhagens estudadas, bem como o tempo de incubação para atingir a concentração máxima, sendo que o conteúdo mais alto foi encontrado na linhagem ATCC 44953. A adição de 2 % de etanol (v/v) ao meio de cultura contendo 2 % de glicose (p/v) resultou em aumento do nível de citocromo P-450, indicando o efeito indutor do etanol. Os resultados deste trabalho mostram a importância de estabelecer condições de cultivo para obtenção de células com altas concentrações da enzima, uma vez que fatores como a composição do meio de cultura, o tempo de incubação e a linhagem empregada podem influenciar a produção de citocromo P-450 por S. cerevisiae.
Título em inglês
Induction of cytochrone P450 production in Saccharomyces cerevisiae
Palavras-chave em inglês
Cultivation conditions
Cytochrome P-450
Saccharomyces cerevisiae
Resumo em inglês
Saccharomyces cerevisiae has been employed as experimental model in mutagenicity tests due to the presence of a cytochrome P-450 system capable of metabolizing promutagens to its active form. The large number of S.cerevisiae strains and their different capacity of producing cytochrome P-450 make the definition of the ideal cultivation conditions to obtain cells with high enzyme content difficult. Moreover, there are only a few reports related to this subject. The aim of this work is evaluate the ideal cultivation conditions to produce cytochrome P-450 by S. cerevisiae. For this purpose, four different S. cerevisiae strains were cultured under different cultivation conditions in order to evaluate the influence of factors such as carbon source, incubation time and addition of ethanol to the culture media. It was found that the cytochrome P-450 content was higher in cells growth on strongly fermentable carbon source and harvested at the end of the exponential growth phase. Our results also showed that the cytochrome P-450 concentration varied among the strains studied, as well as the incubation time to reach the maximum level. The highest content was found in the ATCC 44953 strain and the addition of 2 % ethanol (w/w) to the culture media containing 2 % glucose (w/v) increased the cytochrome P-450 amount, indicating the induction of cytochrome P-450 production by ethanol action. These results show the importance of establishment of the cultivation conditions to obtain cells with high cytochrome P-450 concentrations, considering that factors such as the culture media, incubation time and strain employed can influence the cytochrome P-450 production by S.cerevisiae.
 
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MiriamMatuo.pdf (404.49 Kbytes)
Data de Publicação
2007-12-19
 
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