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Dissertação de Mestrado
DOI
https://doi.org/10.11606/D.9.2007.tde-26112013-100904
Documento
Autor
Nome completo
Bruno Corrêa Múfalo
E-mail
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
São Paulo, 2007
Orientador
Banca examinadora
Soares, Irene da Silva (Presidente)
Almeida, Sandro Rogério de
Braga, Érika Martins
Título em português
Avaliação da resposta imune de anticorpos contra proteínas recombinantes derivadas do Antígeno 1 de Membrana Aplical (AMA-1) de Plasmodium vivax em indivíduos de áreas endêmicas de malária do Brasil
Palavras-chave em português
AMA-1
Antígenos de bactérias
Imunologia (Pesquisa)
Malária (Estudo clínico)-Brasil
Malária Humana
Plasmodium vivax
Proteínas recombinantes (Avaliação)
Resumo em português
O Antígeno 1 de Membrana Apical (AMA-1) de Plasmodium sp tem sido sugerido como candidato a compor uma vacina contra a malária. No presente estudo geramos cinco proteínas recombinantes baseadas em diferentes regiões do ectodomínio de AMA-1 de Plasmodium vivax, o qual compreende os domínios I a III, com intuito de mapear regiões particularmente imunogênicas da proteína. Cada uma das cinco proteínas recombinantes foi expressa em Eschericha coli a partir do vetor pET-28a em fusão com a cauda de histidina e purificadas por cromatografia de afinidade. As diferentes proteínas recombinantes foram comparadas, por ELISA, quanto ao reconhecimento por anticorpos IgM, IgG e subclasses de IgG de 100 indivíduos infectados por P. vivax procedentes de áreas endêmicas do Estado do Pará e 32 indivíduos não infectados que relataram terem sido acometidos de mais de 10 episódios prévios de malária procedentes do município de Terra Nova do Norte (MT). As freqüências de indivíduos que apresentaram anticorpos IgM foram mais baixas e variaram de 4% (DIII) a 36% (DII-III). Por outro lado, as freqüências de indivíduos que apresentaram anticorpos IgG para DI, DII, DIII, DI-II e DII-III foram 13%, 65%, 12%, 59% e 58%, respectivamente. Podemos observar que as proteínas recombinantes contendo o DII foram particularmente imunogênicas durante a infecção natural. Com o objetivo de avaliar se os epítopos reconhecidos nas cinco proteínas baseadas nos diferentes domínios estão expostos na proteína recombinante correspondente ao ectodomínio (DI-III) gerada previamente, realizamos ensaios de inibição por ELISA utilizando placas sensibilizadas com a proteína DI-III. Nossos resultados sugerem a presença de um maior número de epítopos comuns entre as proteínas recombinantes baseadas nos domínios I-II e ectodomínio de AMA-1. Além disso, observamos que a proporção de indivíduos que apresentaram anticorpos contra DII, DI-II e DII-III aumentou de acordo com o maior número de exposições prévias ao P. vivax. As subclasses de IgG que predominaram contra todas as proteínas foram IgG1, IgG3 e IgG4. Em conjunto, nossos resultados sugerem que as proteínas recombinantes contendo o DII podem ser exploradas em futuros estudos de indução de imunidade protetora contra malária vivax em primatas não-humanos.
Título em inglês
Evaluation of immune response antibodies against recombinant proteins derived from the Apical Membrane Antigen 1 (AMA-1) of Plasmodium vivax in individuals of malaria-endemic areas of Brazil
Palavras-chave em inglês
AMA-1
Antigens of bacteria
Human Malaria
Immunology (Research)
Malaria (Clinical study)-Brazil
Plasmodium vivax
Recombinant Proteins (Review)
Resumo em inglês
The Apical Membrane Antigen 1 (AMA-1) of Plasmodium sp has been suggested as a vaccine candidate against malaria. Herein, to identify novel antigenic epitopes on the Plasmodium vivax AMA-1 ectodomain, we have generated five recombinant proteins, comprising domains I to III. All recombinant proteins were expressed in Escherichia coli using the pET-28a vector system fused to hexahistidine tag for purification by affinity chromatography. Recognition of recombinant proteins by antibodies was evaluated using a panel of sera collected from onehundred P. vivax -infected patients resident in the State of Pará and from thirty-two non-infected individuals, living in the State of Mato Grosso and who have faced a minimum of ten malaria episodes. ELISA analyses demonstrated that protein recognition was highly dependent on IgG antibodies, raging from 13%, 65%, 12%, 59% up to 58%, respectively for DI, DII, DIII, DI-II and DII-III domains. Indeed, we have noticed a lower frequency of recognition, ranging from 4% (DIII) to 36% (DII-III), by sera from those individuals that presented IgM antibodies. Collectively, these data suggest that the DII domain is particularly immunogenic during natural infections. Next, to verify whether the epitopes recognized in these five different recombinant proteins were also expressed in a recombinant protein spanning domains I through III (DI-III), we carried out ELISA inhibition assays using plates coated with the DI-III recombinant protein. Our findings revealed the presence of a higher number of common epitopes among recombinant proteins based on domains I-II and the AMA-1 ectodomain. Moreover, we observed that the proportion of individuals who had presented antibodies against DII, DI-II and DII-III domains increased according to the previous number of P. vivax episodes. Overall, IgG1, IgG3 and IgG4 antibodies were prevalent to all proteins. Taken together, our results demonstrated that DII domain is highly recognized, mainly by IgG antibodies; and open promising perspectives to use this region as an experimental vaccine in non-human primates capable to induce protective immunity against vivax malaria.
 
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Data de Publicação
2013-11-26
 
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  • MUFALO, B, et al. Plasmodium vivax apical membrane antigen-1: comparative recognition of different domains by antibodies induced during natural human infection [doi:10.1016/j.micinf.2008.07.023]. Microbes and Infection [online], 2008, vol. 10, p. 1266-1273.
  • BARBEDO, M. B., et al. Plasmodium vivax malaria vaccine: mapping of epitopes on the Apical Membrane Antigen 1 responsible for interaction with human erythrocytes. In 13th International Congress of Immunology, Rio de Janeiro, 2007. 13th International Congress of Immunology., 2007. Abstract. Available from: http://www.immunorio2007.org.br/iciabstractsposter.pdf.
  • MUFALO, B. C., and SOARES, I. S. Comparative recognition by human antibodies of recombinant proteins representing different portions of the Plasmodium vivax vaccine candidate Apical Membrane Antigen 1. In VI São Paulo Conference, São Paulo, 2006. http://www.eventus.com.br/bioconferences/sprc6/SPRC6_resumosaprovados.pdf., 2006. Abstract.
  • MUFALO, B. C., and SOARES, I. S. Plasmodium vivax Apical Membrane Antigen 1: Comparative recognition by human antibodies of recombinant proteins representing different portions of the ectodomain. In XXII Annual Meeting of the Brazilian Society of Protozoology. XXXIII Annual Meeting on Basic Research in Chagas Disease, Caxambu, 2006. ABSTRACTS., 2006. Abstract.
  • MUFALO, B. C., e SOARES, I. S. Geração de proteínas recombinantes baseadas nos subdomínios do Antígeno 1 de Membrana Apical de Plasmodium vivax (PvAMA-1) e análise comparativa de suas propriedades antigênicas. In XI Semana Farmacêutica de Ciência e Tecnologia, São Paulo, 2006. Revista Brasileira de Ciências Farmacêuticas.São Paulo : Faculdade de Ciências Farmacêuticas, 2006. Resumo.
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