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Tesis Doctoral
DOI
https://doi.org/10.11606/T.87.2017.tde-25082016-145258
Documento
Autor
Nombre completo
Sandra Fernanda Suárez Patiño
Instituto/Escuela/Facultad
Área de Conocimiento
Fecha de Defensa
Publicación
São Paulo, 2016
Director
Tribunal
Jorge, Soraia Attie Calil (Presidente)
Azzoni, Adriano Rodrigues
Lemos, Marcos Alexandre Nobre
Mendonça, Ronaldo Zucatelli
Soares, Carlos Roberto Jorge
Título en portugués
Produção de proteínas recombinantes em células BHK-21 cultivadas em meio livre de soro fetal bovino.
Palabras clave en portugués
Semliki Forest Virus
Células BHK-21
Glicoproteína do vírus da raiva
Meio livre de soro
Proteína não estrutural 3 do vírus da hepatite C
Proteína verde fluorescente
Soro fetal bovino-SFB
Resumen en portugués
Células eucariotas usadas como plataforma de expressão de proteínas recombinantes são geralmente cultivadas com soro fetal bovino (SFB), porém, abordagens biotecnológicas atuais sobre cultura de células devem evitar o uso deste suplemento, devido a problemas de custo, variações entre os lotes e risco de contaminação. Assim, nosso objetivo foi expressar as proteínas recombinantes: GFP (proteína verde fluorescente), NS3 (proteína não estrutural 3 do vírus da hepatite C) e RVGP (glicoproteína do vírus da raiva) em células BHK-21 adaptadas em meios livres de soro fetal bovino (SFM) usando o sistema de expressão baseado no Semliki Forest Virus (SFV). Os resultados do presente trabalho mostraram que células adaptadas em SFM cresceram de forma eficiente, produziram mais partículas virais recombinantes de SFV do que células suplementadas com soro, sendo que estas partículas virais podem ser usadas diretamente para imunização, pois garantiram uma amplificação e expressão eficiente das diferentes proteínas dentro da célula hospedeira.
Título en inglés
Production of recombinant proteins in BHK-21 cells cultured in serum free media.
Palabras clave en inglés
BHK-21 cells
Fetal bovine serum
Green fluorescent protein
Hepatitis C virus non-structural protein 3
Rabies virus glycoprotein
Semliki Forest Virus
Serum-free medium
Resumen en inglés
Eukaryotic cells are cultured with serum, however current biotechnological approaches of cell culture need to avoid using of this supplement, due to the high costs, lot-to-lot variation and risk of contamination. Thus, our aim was to express the recombinant protein: GFP (green fluorescent protein); NS3 (Hepatitis C virus non-structural protein 3) and RVGP (rabies virus glycoprotein) in BHK-21 cells cultured in serum free culture based on Semliki Forest Virus system. The results of this work showed that cells cultured in serum-free media (SFM) were grown efficiently, they were produce more recombinant viral particles when compared with cells supplemented with SFB. These viral particles can be used directly for immunization, since generated amplification and expression efficient of different proteins within the host cell.
 
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Fecha de Publicación
2017-01-12
 
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