Controle da composição do copolímero P3HB-co-3HHx por indução gradativa da expressão dos genes phaA e phaB em Pseudomonas sp. LFM461.

Cespedes, Lucas Garbini

doi:10.11606/D.87.2017.tde-16012017-152114

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Master's Dissertation

DOI

https://doi.org/10.11606/D.87.2017.tde-16012017-152114

Document

Master's Dissertation

Author

Cespedes, Lucas Garbini (Catálogo USP)

Full name

Lucas Garbini Cespedes

Institute/School/College

Interunidades em Biotecnologia

Knowledge Area

Biotechnology

Date of Defense

2016-10-25

Published

São Paulo, 2016

Supervisor

Gomez, José Gregorio Cabrera (Catálogo USP)

Committee

Gomez, José Gregorio Cabrera (President)
Araujo, Welington Luiz de
Baldini, Regina Lúcia

Title in Portuguese

Controle da composição do copolímero P3HB-co-3HHx por indução gradativa da expressão dos genes phaA e phaB em Pseudomonas sp. LFM461.

Keywords in Portuguese

Pseudomonas
Controle da composição
P3HB-co-3HHx
Polihidroxialcanoatos
Polímeros biodegradáveis

Abstract in Portuguese

Os copolímeros de 3-hidroxibutirato e 3-hidroxihexanoato (P3HB-co-3HHx) são da família dos polihidroxialcanoatos (PHA), materiais termoplásticos e biodegradáveis acumulados por bactérias a partir de fontes de carbono renováveis. O P3HB-co-3HHx desperta interesse industrial para frações de 3HHx menores que 20 mol%, assemelhando-se ao polietileno de baixa densidade. Neste projeto, criou-se um sistema genético para controlar a composição do copolímero P3HB-co-3HHx pela indução de genes da biossíntese de precursores 3HB. Baseado no promotor lac foram construídas cinco versões do plasmídeo de controle de copolímero (pCC) utilizando o promotor Lac. Porém, mesmo com a versão mais aprimorada, não foi possível o controle de composição de P3HB-co-3HHx em Pseudomonas sp. LFM461. Através de experimentos de atividade enzimática e RT-qPCR do cDNA do gene phaA e phaB, foi possível indicar que o problema está na impossibilidade do promotor Lac de promover expressão dos genes de biossíntese de 3HB presentes nos pCC.

Title in English

Composition control of P3HB-co-3HHx through gradative expression of phaA and phaB genes in Pseudomonas sp. LFM461.

Keywords in English

Pseudomonas
Biodegradable polymers
Composition control
P3HB-co-3HHx
Polyhydroxyalkanoates

Abstract in English

Polyhydroxyalkanoates (PHA) are polyesters material accumulated by bacteria which has thermoplastic and biodegradable proprieties and can be produced from renewable feedstocks. Copolymers of 3-hydroxybutirate and 3-hydroxyhexanoate (P3HB-co¬-3HHx) which contain less than 20mol% of 3HHx have being researched for its industrial proprieties. Recently, our laboratory has been researching a Pseudomonas sp. strain, LFM461, which can produce high 3HHx content when hosting PHA biosynthesis genes from Aeromonas. In this project, it was design a genetic system for control of P3HB-co-3HHX composition through induction of 3HB monomers biosynthesis. Thus, five versions of a copolymer control plasmid (pCC) was built based on Lac promoter. However, even through improvements on stability and expression profile of pCC it was not possible to stablish an assay of successful PHA composition control in Pseudomonas sp. LFM461. By enzymatic activity and RT-qPCR of cDNA experiments we have indications of problems of Lac promoter on driving the expression of 3HB genes in pCC.

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Publishing Date

2017-01-16

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