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Dissertação de Mestrado
DOI
https://doi.org/10.11606/D.87.2012.tde-11062012-083314
Documento
Autor
Nome completo
Viviane Midori Murata
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
São Paulo, 2012
Orientador
Banca examinadora
Moro, Ana Maria (Presidente)
Ferreira, Luis Carlos de Souza
Giordano, Ricardo José
Título em português
Produção e caracterização da porção Fab do anticorpo anti-digoxina utilizando a tecnologia de phage display.
Palavras-chave em português
Anticorpos monoclonais
Clonagem
Digoxina
Fármacos
Hibridomas
Sistema cardiovascular
Resumo em português
A digoxina é um medicamento usado para tratar distúrbios cardíacos, com janela terapêutica muito estreita. Para combater seu efeito tóxico, fragmentos Fab do anticorpo policlonal anti-digoxina estão disponíveis comercialmente. Nosso objetivo foi a obtenção de variantes de fragmentos Fab do anticorpo monoclonal anti-digoxina usando a tecnologia phage display, que permite gerar fragmentos de anticorpos de alta afinidade e especificidade. Uma biblioteca combinatória de fragmentos Fab anti-digoxina foi construída no vetor pComb3X a partir do RNA total do hibridoma anti-digoxina. Seis clones foram isolados, todos com sequência idêntica na cadeia pesada. A cadeia leve apresentou 2 clones idênticos, um pseudogene e um clone com um aminoácido distinto no CDR2. Quatro clones apresentando variações na sequência do framework1 da cadeia leve foram expressos como fragmentos Fab solúveis. Todos apresentaram ligação à digoxina-BSA por ELISA e Western blotting. A ligação específica do anticorpo também foi confirmada pelo BIAcore, que permitiu ranqueamento entre os clones.
Título em inglês
Production and characterization of the Fab portion of anti-digoxin antibody by phage display technology.
Palavras-chave em inglês
Cardiovascular system
Cloning
Digoxin
Drugs
Hybridomas
Monoclonal antibodies
Resumo em inglês
Digoxin is a pharmaceutical used in the control of cardiac dysfunction. Its therapeutic window is very narrow. To counteract the toxic effect, polyclonal anti-digoxin Fab fragments are commercially available. Our goal was to obtain variants of monoclonal anti-digoxin Fab fragments by phage display technology, which allows the generation of high affinity and specificity antibody fragments. Anti-digoxin Fab fragments combinatorial library was constructed into pComb3X vector from total RNA of anti-digoxin hybridoma. Six clones were isolated and the heavy chain presented the same sequence. For the light chain, 2 clones were identical, one was a pseudogene and other one presented a distinct amino acid in the CDR2. Four clones presenting variations in the framework 1 were induced to express soluble Fab fragments, all positive for anti-digoxin binding in ELISA assays and Western blotting. The specific binding of the antibody was further confirmed by BIAcore, which allowed ranking of the clones.
 
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Data de Publicação
2012-07-06
 
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