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Tese de Doutorado
DOI
10.11606/T.87.2015.tde-04122015-141425
Documento
Autor
Nome completo
Eduardo Aliprandini
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
São Paulo, 2015
Orientador
Banca examinadora
Moro, Ana Maria (Presidente)
Boscardin, Silvia Beatriz
Lepique, Ana Paula
Rosa, Daniela Santoro
Stephano, Marco Antonio
Título em português
Obtenção de anticorpos monoclonais humanos antitetânicos.
Palavras-chave em português
Anticorpos monoclonais humanos
Linfócitos B de memória
Plasmablastos
Separação single cell
Tétano
Toxina tetânica
Resumo em português
Anticorpos monoclonais (AcMos) para uso terapêutico correspondem a uma área importante na indústria de biofármacos, em especial os AcMos humanos, que apresentam menor probabilidade de elicitar imunogenicidade. O objetivo deste trabalho consistiu em obter AcMos humanos antitetânicos através da separação de linfócitos B produtores de anticorpos específicos utilizando o antígeno ou de plasmablastos. As células foram coletadas de doadores após vacinação e separadas por equipamento de cell sorter. As regiões variáveis dos anticorpos foram amplificadas e clonadas em vetores de expressão, que foram usados para transfectar transitoriamente células HEK293-F. O uso da toxina tetânica conjugada independentemente com dois marcadores, biotina e Alexa Fluor® 647, possibilitou a separação específica de linfócitos B produtores de AcMos antitetânicos, que foram avaliados por ELISA, western blotting e pela inibição da ligação da toxina ao gangliosídio GT1b. O ensaio in vivo mostrou proteção total dos animais contra a toxina tetânica quando três AcMos foram usados em conjunto.
Título em inglês
Anti-tetanus human monoclonal antibodies.
Palavras-chave em inglês
Human monoclonal antibodies
Memory B cells
Plasmablasts
Single cell separation
Tetanus
Tetanus toxin
Resumo em inglês
Monoclonal antibodies (mAbs) for therapeutic use correspond to a major area of the biopharmaceutical industry, especially human mAbs that are less prone to elicit immunogenicity. The objective of this work was to obtain anti-tetanus human mAbs through separation of memory B lymphocytes producing specific antibodies stained with the antigen or plasmablasts. Cells were collected from peripheral blood of donors after vaccination and separated through cell sorting. The variable regions of the antibodies were amplified and cloned in expression vectors for transient transfection of HEK293-F cells. The staining with the tetanus toxin labeled independently with two markers, biotin and Alexa Fluor® 647 allowed the separation of specific B lymphocytes producing anti-tetanus mAbs. The antibodies expressed were evaluated by ELISA, western blotting and the inhibition of the binding of the tetanus toxin to the ganglioside GT1b. The in vivo neutralization assay showed that a pool of three different mAbs were able to protect mice against the tetanus toxin.
 
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Data de Liberação
2017-12-03
Data de Publicação
2015-12-07
 
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