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Dissertação de Mestrado
DOI
10.11606/D.87.2009.tde-04082009-113900
Documento
Autor
Nome completo
Alexandra Souza dos Santos
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
São Paulo, 2009
Orientador
Banca examinadora
Jorge, Soraia Attie Calil (Presidente)
Lebrun, Ivo
Wolff, José Luiz Caldas
Título em português
Estudo comparativo entre a eficiência de co-transfecção e transfecção de vetores portadores do gene da glicoproteína do vírus rábico (GPV) em células de Drosophila melanogaster S2.
Palavras-chave em português
Drosophila melanogaster
Biologia molecular
Biotecnologia
Células
Expressão gênica
Insetos
Transfecção
Resumo em português
Dentre as vantagens do sistema de expressão gênica em células de drosófila observa-se ainda o estabelecimento rápido de linhagens estáveis de células que secretam de forma eficiente a proteína recombinante. Temos estabelecidas populações de células co-transfectadas S2AcGPV e transfectadas S2AcGPVHy. O objetivo deste trabalho é a comparação da expressão de GPV em células S2 co-transfectadas com os vetores pAcGPV (vetor de expressão) e o pCoHygro (vetor de seleção) ou transfectadas com um único vetor pAcGPVHygro (contendo o vetor de expressão e seleção). As populações obtidas foram analisadas em relação à expressão de GPV em imunoensaios: teste ELISA, Dot Blot, géis de SDS-PAGE, Western Blot, citometria de fluxo (FACS) e microscopia confocal. Os ensaios de imunofluorescência em citometria fluxo (FACS) realizados demonstraram que as células transfectadas e co-transfectadas estão expressando a proteína GPV. Valores entre 0,3 e 4 mg/107 células foram obtidos. Além disso, anticorpos anti-GPV foram capazes de reconhecer a proteína GPV .
Título em inglês
Comparative study between the efficiency of transfection and co-transfection of vectors carrying the gene of the rabies virus glycoprotein (GPV) in cells of Drosophila melanogaster.
Palavras-chave em inglês
Drosophila melanogaster
Biotechnology
Cells
Gene expression
Insects
Molecular biology
Transfection
Resumo em inglês
Among the advantages of the system of gene expression in cells drosófila there is still the rapid establishment of stable cell lines that secrete efficiently the recombinant protein. We have established populations of cells co-transfected S2AcGPV and transfected S2AcGPVHy. The objective of this study is a comparison of the expression of GPV in S2 cells co-transfected with vector pAcGPV (vector of expression) and pCoHygro (vector of selection) or transfected with a single vector pAcGPVHygro (containing the vector of expression and selection gene). The populations were analyzed in relation to the expression of GPV in immunoassays: ELISA test, Dot Blot, the SDS-PAGE gels, Western Blot, flow cytometry (FACS) and confocal microscopy. Tests of immunofluorescence in flow cytometry (FACS) have shown that cells co-transfected and transfected are expressing the protein GPV. Values between 0.3 and 4 mg/107células were obtained. Moreover, anti-GPV were able to recognize the protein GPV.
 
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Data de Publicação
2009-08-27
 
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