A enzima conversora de angiotensina (ECA) catalisa a conversão de angiotensina I (Ang I) no vasoconstritor angiotensina II (Ang II) e hidrolisa a bradicinina (BK). ECA somática (sECA) possui dois domínios homólogos (N e C) que têm 60% de identidade. Embora estas duas regiões tenham homologia grande, o sítio catalítico C-domínio exibe uma atividade três vezes maior do que o N-domínio na hidrolise de Ang I in vivo. Este fato torna interessante o desenvolvimento de novos estudos de inibidores ou a melhoria dos já existentes. O objetivo deste estudo foi obter a região Ala959 até Ser1066 do Cdomínio da sECA (c-sECA), em uma estrutura conformacional semelhante à estrutura nativa. Nós amplificamos a sequência correspondente ao sítio catalítico da c-sECA com 324pb e clonamos esta sequência no vetor pET 28a(+). O segmento (nomeado de pET28_c-sECA) foi expresso em sistema bacteriano. A proteína foi expressa na forma solúvel e a purificação foi feita em uma única etapa utilizando a coluna de afinidade His-tag, a qual produziu a proteína pura. Análises estruturais por dicroísmo circular e fluorescência confirmaram que a proteína recombinante estava na conformação correta, e os ensaios de atividade mostraram que a c-sECA possui atividade enzimática e é inibida por lisinopril.

The angiotensin-converting enzyme (ACE) catalyzes the conversion of angiotensin I (Ang I) to the vasoconstrictor angiotensin II (Ang II) and the hydrolysis of bradykinin (BK). Human somatic ACE (sACE) has two homologous domains (N and C) that show 60% identity. Although these two regions have high homology, the catalytic site of the C-domain exhibits three times more activity than that of the N-domain in the hydrolysis of Ang I in vivo. This fact necessitates the development of new inhibitors or the improvement of existing ones. This study aimed to obtain the Ala959 to Ser1066 catalytic region of C-domain of sACE (c-sACE) in a structural conformation that resembles the native structure. We amplified the 324-bp sequence corresponding to the catalytic site of c-sACE and cloned this sequence into a pET28a(+) vector. The segment (named pET28_c-sACE) was expressed in a bacterial system. The expressed protein segment was soluble, and its purification was performed in one step using a His-tag affinity column. Structural analysis by circular dichroism and fluorescence confirmed that the purified protein is correctly folded, and an activity assay showed that c-sACE possesses enzymatic activity and is inhibited by lisinopril.