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Tese de Doutorado
DOI
10.11606/T.76.2012.tde-05102012-112826
Documento
Autor
Nome completo
Marcos Michel de Souza
E-mail
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
São Carlos, 2012
Orientador
Banca examinadora
Thiemann, Otavio Henrique (Presidente)
Anibal, Fernanda de Freitas
Arruda Neto, Eurico de
Fossey, Marcelo Andres
Kurachi, Cristina
Título em português
Expressão, purificação e caracterização do Leishmania RNA Virus 1-4 e da proteína U5-15k do Tripanosoma brucei
Palavras-chave em português
Leishmania RNA vírus 1-4
Expressão de proteínas
U5-15k Tripanosoma brucei
Resumo em português
O estudo dos protozoários é importante por diversos motivos, entre eles sua diversidade, sua importância evolucionária e impacto na saúde pública. Muitos aspectos tornam o estudo desses seres vivo ainda mais fascinantes, como por exemplo, fenômenos como o trans-splincing e a presença de um vírus em algumas espécies de leishmanias. A proteína U5-15k é considerada de grande importância fazendo parte do spliciossoma. Neste trabalho tivemos o objetivo de iniciar a caracterização desta proteína empregando ferramentas de bioinformática para analisar sua sequencia de aminoácidos, sua estrutura secundária e modelar sua estrutura por homologia, também foi possível otimizar sua expressão, purificação, caracterizar sua auto clivagem e fazer estudos biofísicos de Espalhamento Dinâmico de Luz e Espectroscopia de Dicroísmo Circular. O Leishmania RNA vírus 1-4 (LRV1-4) é um vírus da família Totiviridae de capsídeo icosaédrico que codifica duas proteínas (proteína capsidial e RNA polimerase). Sendo pouco estudado tivemos o objetivo de iniciar a caracterização molecular deste vírus com objetivos futuros de empreender estudos estruturais e funcionais. Não foi possível obter expressão recombinante em nenhuma das duas proteínas virais, por isso se optou por se estabelecer um novo protocolo de lise celular e purificação com o qual se obteve imagens inéditas de Microscopia Eletrônica de Varredura, na qual o vírus é purificado ainda envolto em material genético.
Título em inglês
Expression, purification and caracterization of Leishmania RNA Virus 1-4 and U5-15k protein of Tripanosoma bruceiem
Palavras-chave em inglês
Leishmania RNA virus 1-4
Protein Expression
U5-15k Tripanosoma brucei
Resumo em inglês
The study of protozoa is important for several reasons, including their diversity, their evolutionary importance and public health impact. Many aspects make the protozoas study even more exciting, for example, phenomena such as trans-splincing and the presence of virus in some species of Leishmania. The U5-15k protein is considered of great importance as part of the spliciossome machinery. In this work we intended to characterize this protein , this using bioinformatics tools to analyze its amino acid sequence, its secondary structure and its structure by homology modeling, it was possible to optimize expression, purification, characterization and make biophysical studies of their self cleavage of Dynamic Light Scattering and Spectroscopy of Circular Dichroism. The Leishmania RNA virus 1-4 (LRV1-4) is a virus belonging to the Totiviridae family with an icosahedral capsid structure that encodes two proteins (a capsid major protein and an RNA polymerase). It was not possible to obtain the recombinant expression of any of the two viral proteins, so it was decided to establish a new protocol for cell lysis and purification with which it was obtained unprecedented images of Transmission electron microscopy, in which the virus is further purified wrap on genetic material.
 
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Data de Publicação
2012-10-10
 
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  • MANZINE, LIVIA REGINA, et al. Assembly stoichiometry of bacterial selenocysteine synthase and SelC (tRNAsec) [doi:10.1016/j.febslet.2013.02.014]. FEBS Letters [online], 2013, vol. 587, p. 1-5.
  • Souza, M.M., et al. An improved purification procedure for Leishmania RNA virus (LRV). Acta Virologica (English ed.), 2013, vol. 2, p. 100.
  • SOUZA, M. M., et al. Expression recombinant of the capside protein form Leishmania RNA virus. In XXXIX Annual Meeting of SBBq and 1º Latin American Symposium on the Molecular Mechanisms of Skeletal Mineralization, Foz do Iguaçu/PR, 2010. Program and Index.Foz do Iguaçu/PR, 2010. Resumo.
  • SOUZA, M. M., MANZINE, L R, e Thiemann, Otavio H. Leishmania RNA vírus : purificação para estudos estruturais. In XIII Workshop da Pós-Graduação em Física do IFSC, São Carlos, 2009. Caderno de Resumos.São Carlos : Instituto de Física de São Carlos - USP, 2009. Resumo.
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