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Master's Dissertation
DOI
10.11606/D.64.2010.tde-23112010-110422
Document
Author
Full name
Ana Paula Chiaverini Pinto
E-mail
Institute/School/College
Knowledge Area
Date of Defense
Published
Piracicaba, 2010
Supervisor
Committee
Martinelli, Adriana Pinheiro (President)
Carrer, Helaine
Rezende, Jorge Alberto Marques
Title in Portuguese
Transformação genética de maracujazeiro (Passiflora alata Curtis) para resistência ao Cowpea aphid-borne mosaic virus (CABMV)
Keywords in Portuguese
Agrobacterium
Hairpin
Passiflora alata
Potyvirus
Transgenia
Abstract in Portuguese
Uma das espécies que atualmente vem despertando interesse econômico por seu elevado valor de mercado é o maracuzajeiro doce (Passiflora alata Curtis). Entretanto, a cultura é afetada por diferentes doenças que prejudicam a produtividade e a qualidade dos frutos, sendo a doença causada pelo Cowpea aphid-borne mosaic virus (CABMV) a que mais afeta a cultura do maracujazeiro no Brasil. O presente trabalho teve como objetivo a obtenção de plantas transgênicas de P. alata visando resistência ao CABMV. O processo de transformação genética utilizado foi via Agrobacterium tumefaciens, estirpe EHA105, contendo o cassete de expressão com um fragmento do gene da proteína capsidial do CABMV, numa construção tipo hairpin e o gene de seleção nptII que confere resistência ao antibiótico canamicina. Para os experimentos de transformação genética foram utilizados como explantes segmentos de hipocótilo e segmentos internodais. Após 2 a 3 dias de co-cultivo em meio de cultura MS (MURASHIGE; SKOOG, 1962) contendo acetosseringona (100 mM), os explantes foram transferidos para meio de cultura de seleção e regeneração constituído de sais minerais e vitaminas de MS, suplementado com benzilaminopurina (BAP - 1mg/L) + thidiazuron (TDZ - 0,5 mg/L) + canamicina (100 mg/L) + cefotaxima (500 mg/L) + nitrato de prata (4,0 mg/L), pH 5,8. Após 4 a 6 semanas de incubação, determinou-se o número de explantes responsivos e as gemas adventícias desenvolvidas foram transferidas para meio de cultura de alongamento MSM + GA3 (1,0 mg/L) + cefotaxima (500 mg/L) + nitrato de prata (4,0 mg/L). As plantas desenvolvidas foram aclimatizadas e analisadas por PCR, utilizando primers específicos para a detecção do fragmento do gene da proteína capsidial do CABMV e do gene de seleção (nptII). Foram identificadas 47 plantas transgênicas PCR positivas para do gene nptII. Até o momento, a integração do gene nptII foi confirmada por Southern blot em 9 plantas
Title in English
Genetic transformation of passionflower (Passiflora alata Curtis) for resistance to Cowpea aphid-borne mosaic virus (CABMV)
Keywords in English
Agrobacterium
Hairpin
Passiflora alata
Potyvirus
Transgenic
Abstract in English
One species that is currently attracting interest due to its high economic value is the sweet passionflower (Passiflora alata Curtis). However, the culture is affected by different diseases that harm the productivity and fruit quality. The disease caused by Cowpea aphid-borne mosaic virus (CABMV) is the one that more affect the culture of passionflower in Brazil. This work aimed to obtain transgenic plants of P. alata resistant to the CABMV. The genetic transformation process was via Agrobacterium tumefaciens, strain EHA105, containing the expression cassette with a fragment of the coat protein gene of CABMV, in a hairpin construct and the selection gene nptII, which confers resistance to the antibiotic kanamycin. In the experiments of genetic transformation hypocotyl segments and internodal segments were used as explants. After 2-3 days of co-cultivation in MS medium (MURASHIGE; SKOOG, 1962) containing acetosyringone (100 mM), the explants were transferred to the selection and regeneration culture medium consisting of mineral salts and vitamins of MS medium supplemented with benzylaminopurine (BAP - 1 mg/L) + thidiazuron (TDZ - 0.5 mg/L) + kanamycin (100 mg/L) + cefotaxime (500 mg/L) + silver nitrate (4.0 mg /L), pH 5.8. After 4-6 weeks of incubation, it was determined the number of responsive explants. Shoots developed were transferred to elongating culture medium MSM + GA3 (1.0 mg/L) + cefotaxime (500 mg/L) + nitrate silver (4.0 mg/L). The developed plants were acclimatized and analyzed by PCR using specific primers to detect the fragment of CABMV and the selection gene (nptII). It was identified 47 transgenic plants PCR positive for the gene nptII. Until this moment, the integration of the nptII gene was confirmed by Southern blot in 9 plants
 
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Mestrado.pdf (13.65 Mbytes)
Publishing Date
2010-11-24
 
WARNING: The material described below relates to works resulting from this thesis or dissertation. The contents of these works are the author's responsibility.
  • PINTO, Ana Paula Chiaverini, et al. In vitro organogenesis of Passiflora alata [doi:10.1007/S11627-009-9251-5]. In Vitro Cellular & Developmental Biology - Plant [online], 2010, vol. 46, n. 1, p. 28-33.
  • PINTO, Ana Paula Chiaverini, et al. In vitro organogenesis of Passiflora alata [doi:10.1007/s11627-009-9251-5]. In Vitro Cellular & Developmental Biology. Plant [online], 2010, vol. 46, p. 28-33.
  • CORREA, M. F., et al. Transformação genética de Passiflora alata visando resistência ao CABMV (Cowpea aphid-borne mosaic virus). In XXXVI Congresso Paulista de Fitopatologia, São Paulo/SP, 2013. XXXVI Congresso paulista de Fitopatologia., 2013. Resumo.
  • PINTO, Ana Paula Chiaverini, et al. Regeneração in vitro e análise histológica do processo organogênico em maracujá-doce (Passiflora alata). In Congresso Brasileiro de Fisiologia Vegetal, Gramado, 2007. Congresso Brasileiro de Fisiologia Vegetal - Fotossíntese: a esência da vida., 2007. Resumo.
  • PINTO, Ana Paula Chiaverini, et al. REGENERAÇÃO IN VITRO E ANÁLISE HISTOLÓGICA DO PROCESSO ORGANOGÊNICO EM MARACUJÁ-DOCE (Passiflora alata). In XI Congreso Brasileiro de Fisologia Vegetal, Gramado - RS, 2007. XI Congreso Brasileiro de Fisologia Vegetal., 2007. Resumo.
  • PINTO, Ana Paula Chiaverini, et al. Transformação genética de maracujazeiro (Passiflora alata) para resistência ao Cowpea aphid-borne mosaic virus (CABMV). In III Simpósio dos Pós-graduandos do CENA, Piracicaba, 2010. III Simpósio dos Pós-graduandos do CENA., 2010. Resumo.
  • PINTO, Ana Paula Chiaverini, et al. Transformação genética de maracujazeiro-doce (Passiflora alata Curtis) para resistência ao cowpea aphid borne mosaic virus (CABMV). In XII Congresso Brasiliero de Fisiologia Vegetal, Fortaleza/CE, 2009. XII Congresso Brasiliero de Fisiologia Vegetal., 2009. Resumo.
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